ELISA test sistemleri "ds-ifa-hbeAg" ve "ds-ifa-anti-hbe. LLC "npo" teşhis sistemleri tarafından üretilen test sistemleri Plakayı yıkama gereksinimleri

1 Atamayı ayarla

1.1 Kit, birinci ve ikinci tip insan immün yetmezlik virüsüne (HIV-1 ve HIV-2) ve HIV-1 p24 antijenine karşı antikorların insan serumunda ve plazmasında "in vitro" dolaylı enzim- ile aynı anda saptanması için tasarlanmıştır. bağlantılı immünosorbent deneyi.

2 Setin özellikleri ve çalışma prensibi

2.1 Kompozisyonu ayarlayın:

Bileşen Adı	Miktar
immünosorbent	2 tablet
Pozitif kontrol numunesi AT (K + AT)	1 flakon, 3 ml
Pozitif kontrol örneği AG (K + AG)	3 flakon, liyofilize preparasyon
Negatif kontrol örneği (İLE -)	2 şişe 3 ml
Eşlenik çözüm #1 (RK-1)	1 flakon, 12 ml
Eşlenik #2 (Kg-2)	1 flakon, 1 ml
Konjugat seyreltme solüsyonu No. 2 (RR-K2)	2 şişe 18 ml
Substrat Tamponu ( BRS)	2 şişe 18 ml
Kromojen TMB	1 flakon, 1 ml
Tween Fosfat Tampon Konsantresi (FSB-T×25)	2 şişe 50 ml
Reaktifi Durdur	1 flakon, 12 ml
Çok kanallı pipetler için uçlu reaktif banyosu kiti	1 takım
Yapışkan film

2.2 "ELISA-HIV 1.2 AGAT" kitinin ana bileşenleri, immünosorbent, konjugat solüsyonu No. 1 ve konjugat No. 2'dir.

immünosorbent rekombinant HIV-1 (gp41) ve HIV-2 (gp36) antijenleri ve HIV-1 p24 antijenine karşı monoklonal antikorların bir karışımının emildiği bir polistiren tablettir.

Eşlenik çözüm #1 HIV-1 p24 antijenine karşı biyotin işaretli monoklonal insan antikorları ile biyotin işaretli rekombinant HIV-1 ve HIV-2 proteinlerinin bir karışımıdır.

Eşlenik #2 yabanturpu peroksidazı ile konjuge streptavidindir.

Pozitif kontrol numunesi AT- HIV-1 ve HIV-2'ye karşı antikorlar içeren, hepatit C virüsü ve Treponema pallidum'a karşı antikorlar, HIV-1 p24 antijeni ve HBs antijeni içermeyen, 56 ºC'de 3 saat ısıtılarak inaktive edilmiş insan kan serumu.

Pozitif kontrol örneği AG– HIV-1, HIV-2, hepatit C virüsü ve Treponema pallidum ve HBs antijenine karşı antikor içermeyen, 56 ºC sıcaklıkta 3 saat ısıtılarak inaktive edilmiş, doğal p24 HIV-1 antijeni içeren insan kan serumu.

Negatif kontrol örneği– HIV-1, HIV-2, HCV, HIV-1 p24 antijeni ve HBs antijenine karşı antikor içermeyen, 56 ºC'de 3 saat ısıtılarak inaktive edilmiş insan kan serumu.

Setin çalışma prensibi. 1 konjugat solüsyonu ve enfekte kanın serum numuneleri tabletin kuyucuklarına verildiğinde, p24 antijeni hem katı fazdaki spesifik antikorlara hem de konjugat solüsyonun parçası olan monoklonal biyotinlenmiş anti-p24 antikorlarına bağlanır. 1 numara; HIV'e özgü antikorlar, hem katı fazda adsorbe edilmiş rekombinant HIV-1 ve HIV-2 antijenlerine hem de 1 numaralı konjugat solüsyonunda bulunan antijenlere bağlanarak antijen-antikor kompleksleri oluşturur. Anti-p24'e özgü antikorların ve p24 antijeninin bağışıklık kompleksleri, konjugat No. 2 tarafından saptanır. Bağlanmayan bileşenleri yıkadıktan sonra, plakanın oyuklarına bir peroksidaz substrat (hidrojen peroksit) ve TMB kromojen çözeltisi eklenir.

Peroksidaz reaksiyonu, bir durdurma reaktifi (0.9 M sülfürik asit çözeltisi) eklenerek durdurulur ve kuyucuklardaki çözeltinin renk yoğunluğu, 450 nm dalga boyunda bir optik yoğunluk (OD) değeri olarak bir spektrofotometre üzerinde ölçülür.

OD değeri, bir serum veya plazma numunesindeki spesifik antikorların ve/veya p24 antijeninin konsantrasyonu ile doğru orantılıdır. Serum örneğindeki antikorların ve/veya p24 antijeninin içeriği ne kadar yüksek olursa, boyama yoğunluğu da o kadar yüksek olur.

2.3 Set tutmak için tutmak için tasarlanmıştır 24 yapım ELISA: 1 ayar - 1 şerit (8 delik). Toplam - 192 tanımlar kontrol örnekleri dahil.

3 Kiti kullanırken alınacak önlemler

3.1 Kitin tüm bileşenleri kullanılan konsantrasyonlarda toksik değildir. Bununla birlikte, potansiyel olarak enfekte olduğu düşünülmesi gereken, HIV, hepatit B virüsü veya başka herhangi bir viral enfeksiyon patojenini depolayabilen ve iletebilen, test edilmiş tüm insan serumu (plazma) numuneleriyle, kullanılmış çözeltiler ve sıvılarla, çeşitli ekipmanlarla çalışın. analiz sürecinde kontamine olmuş, kiti kullanırken belirli güvenlik önlemleri gerektirir:

İş, özel donanımlı bir odada yapılmalıdır;

, , ve .

3.2 Sülfürik asit içeren durdurma reaktifi tahriş edicidir. Cilt ve mukoza zarları ile teması halinde bol su ile yıkayınız.

3.3 Kit ile çalışırken, iş yerlerine besleme ve egzoz havalandırması sağlanmalıdır.

3.4 Laboratuarda kitlerle çalışan tüm kişiler, gerekliliklere uygun olarak zorunlu tıbbi muayeneden geçmelidir.

3.5 Tıbbi atık ve/veya kullanılmamış, süresi dolmuş kitler uygun şekilde imha edilmelidir.

4 Bir setle çalışmak için kurallar

4.1 Yanlış sonuçları hariç tutmak için, test numuneleri bakteri üremesini önleyen koşullar altında hazırlanmalı ve saklanmalıdır. Toplanmış serum bileşenleri veya tortu içeren serum numuneleri, 3000 rpm'de (5-10) dakika santrifüjlenerek berraklaştırılmalıdır. Serum örnekleri (2-8) °C'de en fazla 5 gün saklanabilir. Dondurulmuş numuneler (tercihen en az eksi 20 °C sıcaklıkta) 1 yıldan fazla saklanamaz. Numunelerin tekrarlanan donma-çözülme döngülerinden kaçınılmalıdır.

Unutulmamalıdır ki hemoliz, hiperlipidemi, bakteri üremesi olan numuneler ile dondurulmadan uzun süre saklanan numuneler analiz için uygun değildir.

Sonuçların güvenilirliği aşağıdaki kurallara bağlıdır:

Son kullanma tarihinden sonra kitin kullanılmasına ve ayrıca farklı serilerdeki kitlerin bileşenlerinin karıştırılmasına izin verilmez;

Her reaktifin hazırlanması için ayrı bir kap kullanılmalıdır;

Reaktiflerin hazırlanması için kullanılan tüm gereçleri dezenfektanlar ve deterjanlarla işlemden geçirmeyin. Gerekirse içme suyuyla durulayın ve ardından beş kez damıtılmış suyla durulayın;

TMB ve RX kromojen ile çalışmak için solüsyonlar, pipet uçları ve tabaklar için ayrı kaplar kullanmak gerekir.

Reaktiflerin iyice karıştırılmasına özen gösterilmelidir;

Plak kuyucuklarının solüsyon ve reaktiflerle doldurulması ve boşaltılması arasındaki süre en az 30 s olmalıdır. ELISA ayarının tüm aşamalarında kuyucukların kurumasına izin verilmez;

Yıkayıcıyı kullanırken, plakayı ve bağlantı hortumlarını yıkama solüsyonu için kabın durumuna dikkat edin: bunlarda bakteri veya mantar üremesi belirtileri görülmemelidir;

Ortalama dozun değeri ve pipetleme sonuçlarının yakınsaması için onaylanmış, değiştirilebilir uçlu otomatik pipetlerin kullanılması gerekir (hata %3'ten fazla değil);

Dağıtıcılar ve çalışma yüzeyleri, hacim oranı %70 olan etil alkol içeren bir çözelti ile işlenmelidir. Kloramin ve diğer klor içeren maddeleri kullanmayınız;

Test ve kontrol numunelerinin işlenmesi için tek kullanımlık pipet uçlarının kullanılması önerilir. Kit reaktiflerinin yanı sıra her serum numunesi ayrı bir uç ile toplanmalıdır.

PK-1'i kuyucuklara verirken, tabletin yüzeyine ve kuyulardaki solüsyona pipet ucuyla dokunmayın.

Analiz sırasında, çalışma yüzeyine doğrudan güneş ışığından kaçının.

4.2 Liyofilize bileşenleri açarken ve çözerken, flakonların kapaklarında ve duvarlarında kuru madde kalmamasına dikkat edilmelidir.

5 Analiz için gerekli ekipman ve malzemeler

5.1 Tabletin kuyularındaki çözeltilerin optik yoğunluğunu 450 nm dalga boyunda ölçmeye izin veren dikey taramalı spektrofotometre;

Tabletleri yıkamak için yarı veya otomatik cihaz (yıkayıcı);

(37 ± 1) ° C veya benzer özelliklere sahip bir sıcaklığı koruyan TC-80 M2 tipi kuru hava termostatı;

Değiştirilebilir uçlu tek kanallı otomatik pipetler, 0,01'den 5,0 ml'ye kadar sıvı hacminin alınmasına olanak tanır;

0,5 ml'ye kadar sıvı hacimlerini seçmenize izin veren, değiştirilebilir uçlu otomatik 8 kanallı pipetler;

2000 ml kapasiteli ölçüm silindiri;

2000 ml kapasiteli laboratuvar şişesi;

20 ml kapasiteli cam şişeler;

Reaktifler veya Petri kapları için tepsiler (çap 100 mm);

Pamuk yünü tıbbi higroskopik;

Filtre kağıdı;

Lastik cerrahi eldivenler;

Hacim oranı %70 etil alkol içeren çözelti;

Kütle fraksiyonu hidrojen peroksit %6 olan çözelti;

Deiyonize veya damıtılmış su;

Katı atık toplama kabı;

Sıvı atıkları boşaltmak için konteyner.

6 Analiz için hazırlık

6.1 Analizden önce reaktif kitini buzdolabından çıkarın, kutunun kapağını açın ve kitin bileşenlerini belirli bir sıcaklıkta tutun. (18-25) °C, 30 dakika.

Analizden önce tüm serum (plazma) örneklerini ve reaktifleri iyice karıştırın.

Test kitinin kullanılan strip sayısına göre belirlenen reaktif tüketimi Ek A Tablo A.1'de verilmiştir.

6.2 Plaka yıkama solüsyonunun hazırlanması

Dikkat! Analizin başlamasından 15 dakika önce plakayı yıkamak için solüsyonu hazırlayın!

FSB-T × 25 içeren flakon çökelti içeriyorsa, kullanımdan önce (37 ± 1)°C sıcaklıkta çökelti tamamen çözülene kadar ısıtılmalıdır. 2000 ml kapasiteli bir ölçüm silindirine FSB-T × 25 içeren flakonun içeriğini ekleyin, ardından işarete kadar damıtılmış su ekleyin 1250ml ve yavaşça solüsyonu karıştırın. Çözelti (2-8) °C'de 72 saat saklanabilir.

Bir veya daha fazla strip kullanılması durumunda, flakon içeriğini FSB-T × 25 ile (20-30) s kuvvetlice çalkalayın, gerekli çözelti hacmini (Tablo A.1) bir ölçüm kabına veya silindire alın. , gerekli miktarda damıtılmış su ekleyin ve solüsyonu karıştırın . Kullanılmamış FSB-T×25, kitin son kullanma tarihi boyunca (2-8) °C sıcaklıkta kapalı bir şişede saklanabilir.

6.3 İmmünosorbent hazırlama

İmmünosorbent kullanıma hazırdır.

Paketi açın ve gerekli sayıda şeridi çerçeveye takın. Kalan stripleri nem giderici içeren sıkıca kapatılmış bir torbada (2-8) °C'de 3 ay saklayın.

6.4 K + AT, K - , RK-1, PP-K2, BRS ve durdurma reaktifinin hazırlanması

K + AT, K - , RK-1, RR-K2, BRS ve stop reaktifi kullanıma hazırdır.

Dikkat! RK-1 içeren bir şişede çökeltme mümkündür. Süpernatan analiz için kullanılmalıdır.

Şişeler açıldıktan sonra kullanılmamış RK-1, PP-K2, BRS ve durdurma reaktifi, kitin son kullanma tarihi boyunca (2-8) °C sıcaklıkta kapalı şişelerde saklanabilir.

Şişe açıldıktan sonra geri kalan K + AT ve K - kitin son kullanma tarihi boyunca (2-8) ° C sıcaklıkta kapalı şişelerde saklanabilir.

6.5 K + AG solüsyonunun hazırlanması

Dikkat! K + AG solüsyonu analiz başlamadan 15 dakika önce hazırlanmalıdır!

Liyofilize K + AG'yi eski haline getirmek için flakonu açmadan önce flakonun veya tıpanın duvarlarına yapışan partikülleri silkelemek için hafifçe vurun. Şişeyi açın ve mantarı kuru bir yüzeye baş aşağı yerleştirin. Şişeye 0,8 ml distile su ekleyin. Şişeyi bir mantarla kapatın, (18-25) ° C sıcaklıkta 10 dakika tutun ve şişeyi hafifçe eğin ve döndürün, köpük oluşumunu önleyerek tamamen eriyene kadar içeriğini karıştırın.

Sulandırılmış K + AG, kapalı bir şişede (2-8) ° C sıcaklıkta bir ay, eksi 20 ° C sıcaklıkta - altı ay saklanabilir. Geri yüklenen K + AG'nin tek bir donma-çözülmesine izin verilir.

6.6 Çalışma seyreltmesinde Kg-2 çözeltisinin hazırlanması

Kg-2 içeren şişeden Tablo A.1'de belirtilen hacmi alın ve PP-K2 içeren şişeye aktarın. Şişenin içeriğini, köpük oluşmasını önleyerek iyice karıştırın.

Bir veya daha fazla şerit kullanılıyorsa, gerekli miktarda PP-K2'yi temiz bir şişeye alın, Kg-2'yi Tablo A.1'e göre ekleyin ve çözeltiyi köpürtmeden karıştırın.

Dikkat!Çalışma seyreltmesindeki Kg-2 solüsyonu kullanımdan hemen önce hazırlanır! Çalışma seyreltisindeki Kg-2 solüsyonu (18-25) °C sıcaklıkta 15 dakika saklanabilir. Yalnızca yeni bir reaktif tepsisi ve yeni uçlar kullanın!

Kg-2'nin geri kalanı, kitin son kullanma tarihi boyunca (2-8) °C sıcaklıkta kapalı bir şişede saklanabilir.

6.7 Çalışma substratı solüsyonunun hazırlanması

TMB kromojen içeren şişe kullanılmadan önce (37±1) sıcaklıkta ısıtılmalıdır.° C kristallerin tamamen çözünmesine kadar.

TMB kromojenli şişeden Tablo A.1'de belirtilen hacmi alın ve BRS'li şişeye aktarın. Şişenin içeriğini, köpük oluşmasını önleyerek iyice karıştırın.

Bir veya daha fazla strip kullanılıyorsa, gerekli miktarda BRS'yi temiz bir şişeye alın, TMB kromojeni Tablo A.1'e göre ekleyin ve solüsyonu köpürtmeden karıştırın.

Dikkat! Substratın çalışma solüsyonu, ışıktan korunan bir yerde kullanımdan hemen önce hazırlanır! Çözelti ışıktan korunarak (18-25) °C sıcaklıkta 20 dakika saklanabilir.

Çözelti ışıktan ve metaller veya metal iyonları ile temastan korunmalıdır. Substrat solüsyonu kullanılmadan önce renksiz olmalıdır. Reaksiyon sırasında substrat çözeltisi ile temas edecek bulaşıklar sentetik deterjan kullanılmadan yıkanmalıdır. Yalnızca yeni bir reaktif tepsisi ve yeni uçlar kullanın!

TMB kromojenin geri kalanı, kitin son kullanma tarihi boyunca (2-8) °C'lik bir sıcaklıkta kapalı bir şişede saklanabilir.

7 Plaka yıkama gereksinimleri

Yıkamanın tüm aşamalarında, tüm kuyuların doldurulmasını ve sıvının bunlardan tamamen çıkarılmasını (aspirasyonunu) kontrol etmek gerekir;

Her yıkamada, komşu kuyulardan sıvı taşmadan ve taşmadan tüm kuyucukları ağzına kadar bir solüsyonla (kuyu başına 0.30-0.35 mi) doldurmak gerekir;

Kuyuları 30 saniye boyunca plaka yıkama solüsyonu ile dolu tutun;

Her aspirasyonda, şeritler ters konumda olacak şekilde çerçeveye birkaç kez katlanmış, bir polietilen levha üzerine yerleştirilmiş filtre kağıdına vurarak kalan sıvıyı kuyulardan dikkatlice çıkarın;

Plakanın kötü yıkanması yanlış sonuçlara yol açar.

8 Analiz yapmak

8.1 Tabletin herhangi iki kuyucuğuna ekleyin 0.07 ml(70 ul) K + AT, diğer iki kuyuda - tarafından 0.07 ml(70 ul) K + AG, diğer üç delikte - tarafından 0.07 ml(70 ul) İLE - .

Dikkat! ELISA'yı bir şeritte ayarlarken, K - - için iki kuyu, K + AT için - bir kuyu, K + AG için - bir kuyu kullanılmasına izin verilir.

Tabletin kalan kuyularında ekleyin 0.07 ml(70 µl) üzerinde çalışılan insan serumu (plazma) numuneleri.

Dikkat! Her numune tek kullanımlık bir uç ile alınmalıdır!

8.2 Kontrol numuneleri ve kan serumu (plazma) test numuneleri üzerinden tabletin tüm kuyucuklarına hemen katkıda bulunmak 0.05 mi(50 ul) RK-1. Plakanın kenarlarına hafifçe vurarak kuyucukların içeriğini karıştırın.

8.3 (37 ± 1) ° İçinden 60 dakika.

Dikkat!İnkübasyonun bitiminden (1-2) dakika önce çalışma dilüsyonunda bir Kr-2 solüsyonu hazırlayın (bölüm 6.6).

8.4 Kuyuların içeriğini yıkayıcı ile çıkarın, ardından plakanın kuyularını plaka yıkama solüsyonu ile yıkayın (bölüm 6.2) Yedi kere.

8.5 Plakanın tüm kuyucuklarına ekleyin 0.15ml(150 ul) çözelti Kg-2çalışan yetiştirmede (madde 6.6).

8.6 Plakayı bir filmle kapatın veya bir kapakla örtün ve bir sıcaklıkta bir termostatta inkübe edin. (37 ± 1) ° İçinden 10 dk.

8.7 Plakanın kuyucuklarının içeriğini bir yıkayıcı ile çıkarın, ardından plakaların kuyucuklarını plakayı yıkamak için solüsyonla yıkayın (bölüm 6.2) Yedi kere.

8.8 Tabletin tüm kuyularına girin 0.15ml(150 ul) alt tabaka çalışma çözümü(madde 6.7).

Substratın çalışma solüsyonunu hazırlarken (madde 6.7) F TMB kromojenli lakon kullanılmadan önce (3-5) dakika (37°C) sıcaklıkta ısıtılmalıdır.± 1) °C kristaller tamamen eriyene kadar.

8.9 Plakayı bir filmle kapatın veya bir kapakla örtün ve bir sıcaklıkta bir termostatta inkübe edin. (37 ± 1) ° İLE için karanlık bir yerde 15 dakika.

Dikkat!İnkübasyonun sonunda, HIV-1 ve/veya HIV-2 ve/veya HIV-1 p24 antijenine karşı antikorlar içeren serum numunelerinin bulunduğu kuyularda, çözeltinin rengi, konsantrasyona bağlı olarak değişen yoğunlukta renksizden maviye değişecektir. test serum numunesindeki antikorların ve/veya antijenin

8.10 Tüm kuyucuklara ekleyerek peroksidaz reaksiyonunu durdurun 0.05 mi(50 ul) reaktifi durdur.

Dikkat! Anti-HIV-1 ve/veya HIV-2 antikorları ve/veya HIV-1 p24 antijeni içeren serum numunelerine sahip kuyular, solüsyonun rengini değişen yoğunlukta maviden sarıya değiştirecektir.

8.11 Reaksiyonu durdurduktan en geç (1-2) dakika sonra, bir dalga boyunda tek dalga modunda kuyulardaki OD'yi belirleyin 450 mil.

9 Analiz sonuçlarının işlenmesi

9.2 Sonuçlar yalnızca şu durumlarda dikkate alınır:

OPsr K - değeri 0,2 OE'yi geçmez;

OP K -'nin her bir değeri OP K -'den %30'dan fazla sapmamalıdır. Üç OP K - değerinden biri bu sınırı aşarsa, OP K - hesaplamasından çıkarılmalıdır. Üç ODK değerinden ikisi bu sınırın dışındaysa, test yeni bir reaktif seti üzerinde tekrarlanmalıdır;

OPsr K + AT değeri 1,0 OE'den fazla;

OPsr K + AG'nin değeri 1,0 OE'den fazladır.

9.3 Yukarıdaki koşullar karşılanırsa, formül (1)'e göre kritik değeri (OPcrit.), OE hesaplayın:

OPkrit. = OPsr K - + 0,14 (1).

10 Analitik ve teşhis özellikleri

Duyarlılık reaktif kiti ELISA-HIV 1.2 AGAT HIV-1 p24 antijeninin saptanması için –

özgüllük reaktif kiti ELISA-HIV 1.2 AGAT– %100 Standart AT(-)HIV. Birinci ve ikinci tip insan immün yetmezlik virüsüne (HIV-1,2) ve HIV-1 antijenine (p24) karşı antikorlar içermeyen standart serum paneli. CJSC MBS.

11 Kit serbest bırakma formu

11.1 Set beş konfigürasyonda mevcuttur:

1 set 1P - manuel analiz. Set, katlanabilir bir plaka üzerinde 12 ELISA çalışması için tasarlanmıştır: 1 çalışma - 1 şerit (8 delik). Toplamda - kontrol numuneleri dahil 96 tespit;

2 set 2M - manuel analiz. Kit, yekpare plakalar üzerinde 2 ELISA çalışması için tasarlanmıştır: 1 çalışma - 1 plaka. Toplam - 192 belirleme, kontrol numuneleri dahil;

3 2P'yi ayarla- manuel analiz. Set tutmak için tasarlanmıştır 24 yapım 2 kişilik ELISA katlanabilir x tablet: 1 ayar - 1 şerit (8 delik). Toplam - 192 tanım, kontrol numuneleri dahil;

4 set A2M - otomatik analizörde analiz. Kit, yekpare plakalar üzerinde 2 ELISA çalışması için tasarlanmıştır: 1 çalışma - 1 plaka. Toplam - 192 belirleme, kontrol numuneleri dahil;

5 set A2P - otomatik analizörde analiz. Kit, 2 katlanabilir plaka üzerinde 24 ELISA çalışması için tasarlanmıştır: 1 çalışma - 1 şerit (8 delik). Kontrol numuneleri dahil olmak üzere toplam 192 tespit.

12 Kitin saklama ve kullanım koşulları

12.1 Kit, tüm raf ömrü boyunca temiz, nemden ve ışıktan korunan bir odada (2-8) ° C sıcaklıkta saklanmalıdır. Kit bileşenlerini dondurmayın.

12.2 Güvenilir sonuçlar elde etmek için kitin kullanım talimatlarına sıkı sıkıya bağlı kalmak gerekir.

12.3 Kitin son kullanma tarihi 12 ay.

Ek A

Tablo A.1 - ELISA kitinin reaktiflerinin tüketimi

reaktif, ml

Kullanılan şerit sayısı, adet.

Plakayı yıkamak için çözeltinin hazırlanması

FSB-T×25

damıtılmış su

Çalışma seyreltmesinde Kg-2 çözeltisinin hazırlanması

RR-K2

Substrat çalışma solüsyonu hazırlama

Kromojen TMB

Kaynakça

	Sıhhi düzenlemeler	Belarus Cumhuriyeti Sağlık Bakanlığı'nın 16 Aralık 1998 tarih ve 351 sayılı Emri HIV / AIDS sorununa ilişkin konuları düzenleyen departman yönetmeliklerinin revizyonu hakkında
	Belarus Cumhuriyeti Sağlık Bakanlığı'nın 25 Kasım 2002 tarih ve 165 sayılı Emri Sağlık kuruluşları tarafından dezenfeksiyon ve sterilizasyonun yapılması hakkında
	Belarus Cumhuriyeti Sağlık Bakanlığı'nın 28 Nisan 2010 tarih ve 47 sayılı Kararı Çalışanların zorunlu tıbbi muayenelerini yapma prosedürü ve Belarus Cumhuriyeti Sağlık Bakanlığı'nın belirli kararlarının geçersiz kılınmasına ilişkin Talimatın onaylanması üzerine

Vücudun durumunun kapsamlı bir değerlendirmesini yapmak için bir ELISA teşhis yöntemi kullanılır. ELISA kan testi, enfeksiyöz, hematolojik, birincil ve ikincil immün yetmezlikleri teşhis etmek için tasarlanmıştır.

ELISA analizi nedir

Birçok hasta ELISA yöntemiyle ilgileniyor: bu nedir, çalışma ne için? Enzim immunoassay nispeten yakın zamanda kullanılmıştır. Başlangıçta antijenik yapıları incelemek için kullanıldı ve sadece bilimsel amaçlarla yapıldı. Daha sonra bilim adamları, enzimlerin yardımıyla devam eden bir hastalığa yanıt olarak ortaya çıkan spesifik antikorları tanımlamanın mümkün olduğu sonucuna vardılar.

Başlangıçta, bu teknik yalnızca dar profilli tıbbi kurumlar tarafından, özellikle kan nakli istasyonlarında kullanıldı. HIV enfeksiyonunu saptamak için ELISA yöntemi özellikle önemlidir.

Günümüzde bu yöntem geniş bir uygulama alanına sahiptir. Modern laboratuvarlar bunu teşhis etmek için kullanır:

• tümörler;
• hormonal bozukluklar;
• enfeksiyonlar;
• kronik veya önceden aktarılmış bulaşıcı süreçler;
• helmintler

Vücutta bulaşıcı bir süreç meydana gelirse, bu tür bir teşhis, hastalığın türünü belirlemek için en uygun olarak kabul edilir.

Yöntemin özü ve türleri

ELISA yöntemi - nedir, bu tür araştırmaların özü nedir? Bu ve diğer birçok soru hastaların ilgisini çekmektedir. Bu teşhis yönteminin temeli, vücudun bağışıklık hücrelerinin bulaşıcı ajanların antijenlerine bağlanmasıdır. Ortaya çıkan kompleks, özel bir enzim kullanılarak belirlenir.

ELISA yönteminin prensibini anlamak için antijen-antikor reaksiyonunun nasıl ilerlediğini bilmeniz gerekir. Bir antijen, enfeksiyonla birlikte giren vücuda yabancı bir protein molekülüdür. Grupta eşleşmeyen yabancı kan parçacıkları da antijen olarak kabul edilir. Vücutta, yabancı maddelere karşı korunmayı amaçlayan bir bağışıklık tepkisi oluştururlar. Bu nedenle insan vücudu, antijenlere bağlanabilen ve bir bağışıklık kompleksi oluşturan antikorlar - immünoglobülinler üretir. Bu tür bileşiklerin bağışıklık hücreleri tarafından tanınması ve yok edilmesi çok daha kolaydır.

Bu tür bağışıklık komplekslerinin varlığına yönelik reaksiyon, kanda benzerlerinin olup olmadığını belirlemek için hazır bileşikler kullanılarak laboratuvarda gerçekleştirilir.

ELISA yönteminin özü oldukça basittir, ancak birçok enfeksiyon ve hastalığı tespit etmek için bir kan testi yapıldığından, birkaç çeşidi vardır. Her biri davranış şeması ve kapsamı bakımından farklılık gösterir. Doğrudan veya dolaylı ELISA olabilir. Doğrudan yöntem, antijenlerle reaksiyona giren hareketsizleştirilmiş antikorların kullanıldığını ima eder. Bu yöntemin ana avantajı, tüm işlemlerin otomatikleştirilebilmesidir, bu da teşhisin biraz zaman alması anlamına gelir.

Dolaylı yöntem, ikincil antikorların kullanıldığını ima eder. Ve katı fazda, antijen immobilize edilir. Analiz, çeşitli antijenlere karşı antikorları belirlemenizi sağlar. Bu, daha doğru bir sonuç elde etmeye yardımcı olur, ancak yöntem karmaşıktır.

Çalışmanın Faydaları

ELISA yönteminin diğer tanı yöntemlerine göre birçok avantajı vardır. Ana olanlar şunları içerir:

• yüksek hassasiyet;
• bileşenlerin depolanması sırasında stabilite;
• teşhis hızı;
• az miktarda test malzemesi kullanılabilir;
• tüm süreçleri otomatikleştirmek mümkündür;
• enfeksiyon erken bir aşamada tespit edilebilir.

Bu teşhis yöntemi evrenseldir, bu nedenle kitle muayenesi için uygundur. Analiz yardımı ile bulaşıcı sürecin seyrinin dinamiklerini izlemek mümkündür.

Analiz ve malzeme örneklemesi için endikasyonlar

ELISA yöntemini kullanarak bir çalışma yürütmek, çeşitli hastalıklardan şüpheleniliyorsa reçete edilebilir:

Antikorların varlığı için venöz kan incelenir. Analizden önce, çalışmayı zorlaştırabilecek unsurlar ondan izole edilir. Diğer biyolojik sıvılardan da numune alınabilir.

En doğru bilgiyi elde etmek için aç karnına kan örneklemesi yapılır. Gizli bir enfeksiyonu belirlemek için prosedür verildiyse, analizden birkaç hafta önce antibakteriyel ve antiviral ilaçlar almayı bırakmalısınız. Malzemenin alındığı laboratuvarın donanımına göre bir gün içerisinde sonuç alınabilmektedir. Acil durumlarda bu süre birkaç saate indirilir.

Frengi için analiz

ELISA yönteminin kullanılması, başta sifiliz olmak üzere vücuttaki birçok enfeksiyonun varlığını belirlemeye yardımcı olur. Çalışma için aç karnına bir damardan kan alınır. Daha sonra, hastalığın yalnızca vücuttaki varlığını değil, aynı zamanda başlangıcının tam zamanlamasını da belirlemeye yardımcı olan bir çalışma yapılır, çünkü hastalığın seyri sırasında bazı antikorlar kesin olarak tanımlanmış bir sırayla başkaları tarafından değiştirilir.

Akut fazda, hastalığın uzun süreli seyrini gösteren veya kronik bir enfeksiyonun alevlenmesi sırasında, kanda M tipi immünoglobulinler tespit edilecektir A tipi immünoglobulinlerin varlığı, enfeksiyonun vücutta 4'ten fazla yaşadığını gösterir. haftalar. Grup G immünoglobulinleri, hastalığın yüksekliğini veya önceki tedaviyi gösterir.

Kuyuların renk derecesine göre, doygunluğu oluşan bağışıklık komplekslerinin sayısına bağlı olduğundan, bulaşıcı sürecin seyrinin yoğunluğu değerlendirilir.

HIV testi

ELISA yöntemi ayrıca bu durumda analiz yapmak için kullanılır, hastalığın seyri ve ilerlemesi ile ilişkili belirli özelliklere sahiptir. Bu araştırma yöntemi, belirleme için en kabul edilebilir olarak kabul edilir, ancak risk faktörlerine maruz kaldıktan sonra en geç bir ay içinde yapılmalıdır. Bu, 45 günden 6 aya kadar uzanan bir kuluçka döneminin varlığından kaynaklanmaktadır. Bu nedenle analiz altı ay sonra tekrarlanmalıdır.

• askariyaz;
• giardiazis;
• toksoplazmoz vb.

ELISA yönteminin tüm avantajlarına karşın dezavantajları da bulunmaktadır. Ana dezavantaj, bir çalışma yürütürken doktorun hastalık hakkında önceden bir varsayımının olması gerektiğidir.

Yanlışlıkla patojeni bulmanın ve enzim immünoassay özelliklerini belirlemenin bir yolu olmadığında. Test sadece hastanın kanında antikor varlığını gösterir. Ayrıca, bu oldukça pahalı bir analizdir.

Analizin deşifre edilmesi

Niteliksel bir ELISA'nın sonucu, kanda antikorların varlığı veya yokluğu olacaktır. Kantitatif bir analiz yapılırsa, antikor konsantrasyonu sayısal bir değerle veya belirli sayıda + işaretiyle ifade edilebilir.

Ek olarak, aşağıdaki gibi göstergeler:

IgM göstergesi, vücuttaki akut bulaşıcı bir sürecin seyrini gösterir. Tamamen yokluğu, hastalığa neden olan ajanın yokluğunu veya kronik aşamaya geçişini gösterebilir.

Negatif bir IgM testi ile bir IgA okuması, kronik veya gizli bir enfeksiyonu gösterir. IgM ve IgA'nın eşzamanlı varlığı, hastalığın akut bir aşamada olduğunu gösterir. IgG'nin varlığı, hastalığın kronik aşamaya geçişini veya tam iyileşmeyi ve bağışıklığın gelişimini gösterir.

Artık kendi kendinize yapabileceğiniz özel ELISA testleri var.

S.N. IGOLKINA, V.F. PUZYREV, L.G. ZİNA, N.M. DENİZOVA, A.N. BURKOV,

AP OBRYADINA, T.I. ULANOVA
LLC "Bilim ve Üretim Derneği" Teşhis Sistemleri ",

Nijniy Novgorod
AKUT VE KRONİK HEPATİT B'NİN ÖZEL TEŞHİSİ VE SONUÇLARININ TAHMİNİ İÇİN ENZİM BAĞIŞIKLIK TEST SİSTEMLERİ "DS-ELISA-HBeAg" ve "DS-ELISA-anti-HBe"
Hepatit B, ciddi semptomlarla karakterize viral bir enfeksiyon hastalığıdır.

inflamatuar karaciğer hastalığı. Ölümlerin yaklaşık %1'i

hastalığın akut dönemi, vakaların% 4-10'unda kronik bir dönüşüm vardır.

müteakip karaciğer sirozunun olası oluşumu ve primer ile süreç

hepatokarsinomlar.

Akut hepatit B insidansındaki düşüş eğilimine rağmen, ilk kez kronik viral hepatit teşhisi konan epidemiyolojik olarak tehlikeli bir hasta grubu ve ayrıca hastalığa neden olan ajanın bir grup taşıyıcısı oluşmaya devam ediyor. Olumsuz bir prognoz, ergenler arasında olduğu kadar üreme çağındaki popülasyonda da yüksek hepatit B insidansı ile ilişkili olmaya devam etmektedir.

Bu nedenle, hepatit B'nin tedavisi, önlenmesi ve teşhisi konuları artık özellikle önemlidir.Şu anda, bu enfeksiyonun belirteçlerini saptamak için enzim immünoassay yöntemleri yaygın olarak kullanılmaktadır. HBV'nin en önemli serolojik belirteçleri, e-antijeni (HBeAg) ve e-antijene karşı antikorları (anti-HBe) içerir. HBeAg, hepatit B virüsünün (HBV) aktif replikasyonunu gösteren yüksek kan enfeksiyonu ile ilişkilidir. Yüksek HBeAg titrelerinin, yüksek DNA polimeraz aktivitesine karşılık geldiği ve her zaman tam Dane partiküllerinin tespiti ile birleştiği tespit edilmiştir. HBeAg içeren serum sağlıklı bir kişinin kanına girdiğinde, enfeksiyon riski serokonversiyondan çok daha yüksektir.

Akut hepatit B'de, HBeAg, kanda bulaşıcı sürecin erken aşamalarında, zaten hastalığın ilk klinik belirtilerinde, HBsAg'nin ortaya çıkmasından bir hafta sonra saptanır. Siklik seyirli akut hepatit B (AHB), HBeAg'nin kısa süreli dolaşımı ile karakterizedir. Yakında, ikterik dönemin 2-3 haftasında, hastalığın olumlu bir sonucunu tahmin etmeyi mümkün kılan anti-HBe ortaya çıkar.

Anti-HBe kanda 2-5 yıl, daha az sıklıkla birkaç ay dolaşır.

HBeAg-antiHBe serokonversiyonunun başlangıcı, aktivitede keskin bir düşüşe işaret eder

bulaşıcı süreç Hastalıktan 2 ay sonra hastaların kanında HBeAg saptanması, patolojik sürecin kronikliğini gösterir. Bu durumda, HBcAg'ye karşı antikorlar ortaya çıktıktan yıllar sonra anti-HBe oluşabilir veya hiç saptanamayabilir.

Anti-HBe'nin görünümü, olumsuz bir prognostik değere sahip olabilir.

ön çekirdek bölgesindeki bir mutasyona karşılık gelen şiddetli formlarda HBV'nin akut dönemi

HBV "e-" suşu oluşumu.

amaç bu çalışma, son derece hassas ve spesifik

HBeAg ve anti-HBe'yi saptamak ve ana özelliklerini değerlendirmek için ELISA test sistemleri.

Malzemeler ve yöntemler.

1. Enzim immunoassay test sistemi "DS-ELISA-HBeAg". Geçerli test başlangıcı

NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod tarafından üretilen, rekombinant HBeAg'ye karşı poliklonal keçi antikorları olan, NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod tarafından üretilen, yaban turpu peroksidaz ile etiketlenmiş bir konjugat, rekombinant HBeAg'ye karşı poliklonal keçi antikorlarıdır. Analiz şeması tek aşamalı bir "sandviç" olup, toplam reaksiyon süresi 1,5 saattir. Serum numunesi seyreltilmeden analiz edilir.

2. ELISA test sistemi "DS-ELISA-anti-HBe". Testin temeli

NPO Diagnostic Systems tarafından üretilen rekombinant HBeAg (AHBV 102),

Nizhny Novgorod, Moskova'da Sorbent Service tarafından üretilen, yaban turpu peroksidazı ile katı faz ve anti-IgG konjugatı üzerine adsorbe edilmiş. Reaksiyon iki aşamada gerçekleşir. Test serumu, hareketsizleştirilmiş antijene 1/10'luk bir seyreltmede eklenir ve inkübasyondan ve bağlanmamış bileşenlerin çıkarılmasından sonra, yaban turpu peroksidaz ile işaretlenmiş insan IgG'sine karşı fare monoklonal antikorları kullanılarak spesifik immünokompleksler saptanır.

3. Geliştirilen test sistemlerini değerlendirmek için 2178 serum örneği kullanıldı.

kan. Bunlardan 480 numune sağlıklı donörlerden alındı. 1680 örnek temsil eder

hepatit B virüsünün çeşitli belirteçlerini içeren kan serumu örnekleridir.

Akut viral hepatit B klinik tanısı olan hastalardan zaman içinde on sekiz numune alındı. Daha önce, NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod tarafından üretilen test sistemleri kullanılarak tüm numuneler HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc varlığı açısından test edildi: "ELISA-HBsAg / m", "DS-ELISA-HBeAg", " DS-ELISA-anti-HBe", "ELISA-anti-HBc".

4. Geliştirilen test sistemlerinin karşılaştırmalı değerlendirmesi,

BIO-RAD, Fransa tarafından üretilen ticari ilaç "Monolisa HBe";

Sonuçlar ve tartışma. NPO "Diagnostic Systems" 2 yeni teşhis kiti geliştirdi: "DS-ELISA-HBeAg" ve "DS-ELISA-anti-HBe". "DS-ELISA-HBeAg" test sistemi, insan kanının serumunda (plazma) hepatit B virüsünün e-antijenini enzim immunoassay ile tespit etmek için tasarlanmıştır ve bulaşıcı sürecin aktivitesini belirleyen spesifik teşhis için kullanılabilir. , hepatit B'nin ciddiyetini ve sonucunu tahmin etmek.

"DS-ELISA-anti-HBe" test sistemi, insan serumunda (plazma) hepatit B virüsünün e-antijenine karşı IgG antikorlarını saptamak için tasarlanmıştır ve

bulaşıcı sürecin seyrini tahmin etmede ve hepatit B için devam eden tedaviyi izlemede kullanılır.

Yeni testlerin özgüllüğünü incelemek için dağılım tahmin edildi

içeren ve içermeyen kan serum numunelerinin optik yoğunluğu (OD)

HBeAg veya anti-HBe. Sağlıklı donörlerden alınan kan serumu örnekleri ve hepatit B virüsünün çeşitli belirteçleri için seçilen kan serumu örnekleri kullanıldı.

kan nakli istasyonları. Çalışmanın sonuçları, iki popülasyon arasında önemli bir ayrım olduğunu gösterdi. HBeAg içermeyen serum örneklerinin OD değerleri 0,011 ile 0,111 arasında, HBeAg içeren serum örneklerinin ana piki ise 2,186 ile 3,186 arasında değişmiştir (Şekil 1a).

Şekil 1a. içeren ve içermeyen serum örneklerinin OD dağılımıHBeAgtest sisteminde "DS-ELISA-HBeAg»
Düşük OD'ye (0.3-0.6) sahip serum grubuna karşılık gelen pik, muhtemelen bulaşıcı sürecin erken aşamalarında alınan serum örnekleridir.

Halihazırda kuluçka döneminde olan HBsAg ve HBeAg, potansiyel epidemiyolojik tehlikelerini doğrulayan hastaların kanında düzenli olarak kayıtlıdır.

Anti-HBe içermeyen serum numunelerinin optik yoğunluk aralığı

0,002 ila 0,122 aralığındaydı ve anti-HBe içeren serum örneklerinin ana pik OD'si 2,431 ila 3,231 aralığındaydı (Şekil 1b).

Pirinç. 1b. Anti-H içeren ve içermeyen serum numunelerinin OD dağılımıOlmak, test sisteminde "DS-ELISA-anti-HBeAg»
Anti-HBe pozitif numunelerin OD dağılımının özellikleri incelenmiştir.

içeren serum ( N=78) ve HBsAg içermeyen ( N=56).


Pirinç. 2a. HBeiçeren pozitif serum örnekleriHBsAgtest sisteminde "DS-ELISA-anti-HBe».

Şekil 2b. OP anti- dağılımının özellikleriHBeiçermeyen pozitif serum örnekleri HBsAgtest sisteminde "DS-ELISA-anti-HBe».
HBsAg içermeyen anti-HBe-pozitif serum numunelerinin %87'sinin optik yoğunlukları 0,41 ila 0,81 arasında değişmektedir (Şekil 2b). Aynı zamanda, HBsAg içeren anti-HBe-pozitif serum numunelerinin sadece %14'ü bu aralıkta OD'ye sahipti (Şekil 2a). HBsAg'ye karşı negatif reaktivite ile geç nekahat fazında, HBeAg'ye karşı antikor titrelerinde tedrici bir düşüş olduğu bilinmektedir (Şekil 2b). Bu nedenle, anti-HBe-pozitif numunelerin baskın konsantrasyonunun 0,8'den düşük bir OD'ye karşılık gelmesi mümkündür.

Elde edilen veriler pozitif ayrımının güvenilirliğini gösterir ve

hastalığın evresine bakılmaksızın negatif kan serumu örnekleri. "DS-ELISA-HBeAg" ve "DS-ELISA-antiHBe" test sistemlerinin duyarlılık ve özgüllük çalışması, "Monolisa HBe" ("BIORAD", Fransa) testi (tablo 1) ile karşılaştırılarak gerçekleştirildi.

tablo 1
Hassasiyet ve özgüllüğün karşılaştırmalı özellikleri

test sistemleri DS-ELISA-HBeAg ve DS-ELISA-antiHB

dizin	HBeAg'un tanımı		anti-HBe'un tanımı
	NPO "DS", DS-ELISA-HBeAg	BİYO-RAD, "Monolisa HBe"	NPO "DS", DS-ELISA-antiHBe	BİYO-RAD,
Miktar araştırılmış örnekler	67	67	32	32
Açıklığa kavuşmuş pozitif örnekler	47	47	16	16
Açıklığa kavuşmuş olumsuz örnekler	20	20	16	16

Tablo 1'de gösterilen veriler sonuçlar arasında %100 uyum göstermektedir.

HBeAg ve anti-HBe'nin kombine endikasyonunun, özellikle bunların kantitatif değerlendirmesinin ek prognostik değeri olduğu bilinmektedir. Anti-HBe titresindeki hızlı bir artış, aktif hümoral bir bağışıklık tepkisini karakterize eder ve kronikleşme tehdidini fiilen ortadan kaldırır. Akut viral hepatit B klinik tanısı olan hastaların kan serum örneklerinde HBeAg/anti-HBe içeriğindeki değişikliği analiz ettik (tablo 2).

Tablo 2
Akut hepatit B hastalarında HBeAg/anti-HBe serokonversiyonunun dinamikleri

İncelendi hasta	Kan alma günü*	HBeAg	HWe karşıtı Ref./Ops.		Anti-HBc	Anti- HBc IgM
	1	1,4+	2,1+	+	+	+
	12	0,5-	1,0+	+	+	+
	21	0,3-	1,3+	+	+	+
	1	1,2+	1,2+	+	+	+
	5	0,4-	1,0+	+	+	+
	13	0,2-	2,5+	+	+	+
	1	1,2+	0,6-	+	+	+
	21	0,2-	4,6+	+	+	+
	30	0,2-	9,7+	+	+	+
	1	2,1+	0,5-	+	+	+
	8	0,6-	1,1+	+	+	+
	28	0,3-	2,8+	+	+	+
	1	0,7-	2,2+	+	+	+
	8	0,3-	2,2+	+	+	+
	15	0,3-	2,8+	+	+	+
	38	0,2-	3,0+	+	+	+
6	1	1,1+	4,4+	+	+	+
	14	0,5-	3,8+	+	+	+

* hastaneye yatıştan itibaren
Tüm serum örnekleri, serolojik belirteçlerin varlığı açısından test edildi.

OGV: HBsAg, anti-HBc, anti-HBc IgM. Gözlem süresi 13 ila 38 gün arasında değişmiştir. 1, 2 ve 6 numaralı hastalarda, HBeAg titresindeki bir düşüşün arka planında zaten anti-HBe tespit edildi. 3 ve 4 numaralı hastalarda, sırasıyla 21 ve 8. günlerde HBeAg'nin kan serumundan kaybolmasından sonra anti-HBe ortaya çıktı. Hastaneye kabul edildikten sonra 5 numaralı hastanın kan serumunda HBeAg tespitinin analizi negatif sonuç gösterdi. Aynı zamanda, anti-HBe'ye dönüşüm, incelemenin ilk gününde kaydedilmiştir.

Tüm denekler, içinde HBeAg'ye karşı antikor titresinde bir artış eğilimi gösterdi.

uygun klinik dinamikleri tahmin etmeyi mümkün kılan kan serumu

OGV'nin belirtileri ve hızlı bir iyileşme.

Yeni test sistemlerinin incelenmesi, yüksek teşhis güvenilirliklerini gösterdi. DS-ELISA-HBeAg" ve "DS-ELISA-antiHBe" karşılaştırmasının sonuçları, "Monolisa HBe" testi ile %100 uyum gösterdi.

Dinamik olarak hepatit B hastalarının serum örneklerinin incelenmesinde, testler

onaylanmış yüksek duyarlılık ve özgüllük.

Test numunelerinin ve konjugatm kısa inkübasyon süresi (1 saat), mümkün olan en kısa sürede terapötik önlemlerin alınması için doğru taktiklerin belirlenmesini mümkün kılar. Oluşturulan test sistemlerinin kurulumu kolay, ekonomiktir (HBeAg tayini için 50 µl, anti-HBe tayini için 10 µl serum gerektirir). Testlerin yüksek kalite özellikleri, bulaşıcı sürecin seyrini tahmin etmede ve devam eden hepatit B tedavisini izlemede başarılı bir şekilde kullanılmalarını mümkün kılar.
EDEBİYAT

1.Mayer K.P. Hepatit ve hepatitin sonuçları / K.P. Mayer.– M., GEOTAR, Tıp, 1999.- C.720

2.Onishchenko G.G. Ulusal güvenliğe yönelik bir tehdit olarak viral hepatitin yayılması / G.G. Onishchenko, L.A. Dementieva // Mikrobiyoloji Dergisi. –2003.-No.4.- S.93-99.

3.Sorinson S.N. Viral hepatit / S.N.Sorinson. - St. Petersburg, Teza, 1997.- 306 s.

4. Baumeister M. Hepatit B Virüsü e Antijene Spesifik Epitoplar ve Ticari Anti-HBe İmmünoassaylerin Sınırlamaları / M. Baumeister // Journal of Medical Virology.- 2000.-N 60.- S.256-263.

5.Kane M. Hepatit B enfeksiyonunun kontrolü için küresel program / M. Kane// Vaccine. - 1995.-N131(Ek 1).- R.47-6. Shunichi CtsÖ. Fulminan Hepatitli Hastalarda Çekirdek Promotöründe Mutasyonlara Sahip Hepatit B Virüsü Suşları / Shunichi Sato, Kazuyuki Suzuki // Annals of Internal Medicine. - 1995.- N122.- R.241-248.

7. Ou J.-H. Hepatit B virüsü e antijeninin moleküler biyolojisi./ J.-H.Ou // Journal of Gastroenterology and Hepatology. - 1997.- No. 12 (Ek 1) - R. 178-187.

8.Tiolais P. Hepatit B virüsü. / P.Tiollais, C.Pourcel, A.Dejean // Doğa. - 1985. - S.317, 489-495
Yayınlanan: Zh. "Klinik laboratuvar teşhisi" - 2005.-№6-S.-34-37

HIV, bizim neslimizin belasıdır. HIV teşhisi için hangi yöntemler mevcuttur, HIV için ELISA testi hakkında derinlemesine bilgi. Nasıl alınır, analiz sonuçları nasıl yorumlanır.

İnsan immün yetmezlik virüsü, neslimizin en korkulan enfeksiyonlarından biridir.

HIV'in bağışıklık sistemimiz üzerinde yıkıcı etkisi vardır, ve hastalığın ilerlemesi zamanında durdurulmazsa edinilmiş immün yetmezlik sendromuna dönüşebilir. HIV, erkek ve kadın genital organları yoluyla cinsel ilişki sırasında eşler arasındaki doğrudan temas yoluyla yayılır. Diğer bir enfeksiyon nedeni, virüsün kan yoluyla girmesi olabilir. Bu, steril olmayan aletlerin kullanılması, enfekte kanın transfüzyonu nedeniyle ve hatta nesiller boyunca meydana gelir: emzirirken enfekte bir anneden bir çocuğa.

Şimdiye kadar, dünyanın dört bir yanındaki bilim adamları, AIDS'i iyileştirebilecek yeni nesil ilaçların yaratılması konusunda kafa karıştırıyorlardı, ancak, büyük bilimsel ilerleme hızına rağmen, insan bağışıklık yetmezliği virüsü gezegene yayılmaya devam ediyor.

ELISA - HIV teşhisi için bir yöntem

20. yüzyıl kuşağının bilim adamları, HIV'i teşhis etmek için en önemlisi kabul edilen birkaç yöntem geliştirdiler. bağlantılı immünosorbent deneyi. HIV için ELISA nispeten yakın zamanda - doksanların başında yapılmaya başlandı. Zamanla, yöntem geliştirildi, yeni ayrıntılar elde edildi. Şimdi ELISA yönteminin güvenilirliği en yükseklerden biridir - yaklaşık% 98. Buna göre, bu yöntem giderek daha sık kullanılmaktadır.

ELISA, bir hastanın HIV testi yaparken karşılaştığı ilk testtir. ELISA yöntemi, kandaki antikorların varlığını belirler. Test kanda antikorların varlığını bulursa, virüs mevcuttur. Bununla birlikte, bu test hakkındaki bilgilerin, immün lekeleme (IB) ve en yeni nesil yöntem olan polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) gibi diğer testler tarafından desteklenmesi gerekir.

Antikorlar, vücuda giren bir enfeksiyona tepki olarak plazma hücreleri tarafından üretilen özel protein bileşikleridir (antikorlar enfeksiyondan 1-2 ay sonra oluşmaya başlar).

HIV'in nedenleri

HIV bulaşmış bir kişiyle temas halindeyseniz veya enfeksiyon riski varsa, doktor size analiz için bir sevk yazacaktır. HIV enfeksiyonu riski taşıyan nesiller şunları içerir:

• bir ay içinde enjeksiyon tedavisi gören;
• özel koruma araçları olmadan cinsel ilişkiye girmek;
• cinsel temas sırasında bulaşan enfeksiyon taşıyıcıları;
• Seksenlerde kan pıhtılaşmasının nedenini keşfetmek için kan transfüzyonu veya enjeksiyonu geçiren hastalar.

HIV durumunuzla ilgili şüpheleriniz ve bulaşma olasılığına ilişkin korkularınız varsa, kapsamlı bir HIV testi yaptırmak için derhal ülkemizdeki herhangi bir sağlık kuruluşundan yardım almanız önerilir. Testlerin sonuçları bir ay içinde alınır. HIV riski taşıyan kişilerin 4 ayda bir taranması önerilir.

Analiz nasıl alınır

HIV için kan testi yaptırmak için özel bir hazırlık yoktur, ancak daha iyidir basit kuralları takip edin:

• akşamları yemek yememek, sabahları aç karnına analiz yapmak daha iyidir;
• vücuda fiziksel iş yüklenmesi tavsiye edilmez;
• sağlıklı beslenin, bir süre sigara ve alkolden uzak durun;
• yanlış test göstergelerini dışlamak için ciddi hastalıkların tedavisinden sonra analiz yapmamalısınız.

İnsan immün yetmezlik virüsü enfeksiyonu ciddi bir tanıdır. Teşhisteki hatalar feci sonuçlara yol açabilir. HIV için ELISA analizi en erişilebilir araştırma yöntemidir, ancak her durumda bilgilendirici değildir.

ELISA - enzim immün testi. ELISA yönteminin görevi, biyolojik materyaldeki immün yetmezlik virüsüne karşı antikorları tespit etmektir. Yöntemi kullanarak, virüslerin kendilerinin değil, yalnızca varlıklarına yanıt olarak üretilen antikorların sıvıdaki varlığını izlemek mümkündür. ELISA cinsel yolla bulaşan hastalıkların teşhisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Cinsel yolla bulaşan hastalıkları belirlemeye yardımcı olur.

Birkaç ELISA türü vardır: doğrudan varyant, dolaylı varyant, sandviç yöntemi. Her durumda, teknik, yabancı bir maddenin penetrasyonunun bir göstergesi olarak hizmet eden antikorların varlığının belirlenmesine dayanır. Bu "işaretleri" ortaya çıkarmak için biyolojik bileşen enzimlerle işlenir.

ELISA, antikorları %96 - 98 doğrulukla saptar, hata önemsizdir. %2-4'tür.

ELISA - HIV teşhisi için bir yöntem

HIV için ELISA analizi tanının ilk aşamasıdır. İmmün yetmezlik virüsünün antijenleri, p24, p15, p17, p31 proteinleri ve gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160 glikoproteinleridir.

Viral bir proteini tespit etmek için bir damardan kanın bir kısmı alınır. ELISA kan testi için gönderilen bir numune, enzim immunoassay reaktifleri ile işlenir. Kandan serum izole edilir. Çalışma sırasında bulunurlarsa, virüs zaten kanda mevcuttur.

Kan kesinlikle aç karnına verilir. Analizden 2 gün önce yağlı yiyecekler yenmesi ve alkol alınması önerilmez. 14 gün içinde antiviral ilaçları almayı bırakmalısınız.

Yöntemin avantajları:

• nispeten düşük maliyetli;
• reaktiflerin yüksek stabilitesi;
• yüksek hassasiyet;
• kısa teslim süresi;
• insan faktörünün minimum etkisi.

ELISA için modern test sistemleri dünya standartlarına göre üretilmektedir. Bu, yöntemin doğruluğunu artırır.

ELISA her zaman güvenilir sonuçlar vermez. Virüs kana girdikten sonra latent (gizli) gelişim aşaması başlar. Virüslerin çoğalmaya başladığı ve henüz antikorların oluşmadığı döneme “seronegatif pencere zamanı” denir. Bu aşamada ELISA yapmak anlamsızdır. Bir enfeksiyon meydana geldiyse, sonuç . Virüsün kendini ne kadar çabuk algıladığı, vücuda kaç tane tehlikeli hücrenin girdiğine bağlıdır. Korunmasız cinsel ilişki veya enfekte kan transfüzyonu ile bu süre minimum olacaktır.

HIV için ELISA'nın yüksek güvenilirliği için çalışma üç kez gerçekleştirilir. İnsan immün yetmezlik virüsü için ELISA için son tarihler:

• Muhtemel temastan 6 hafta sonra,
• 3 ayda,
• altı ay sonra.

HIV için 4. nesil ELISA, enfeksiyonun erken evrelerinde en bilgilendirici yöntemdir. İddia edilen enfeksiyondan 1 ay sonra yapılabilir. Test, 3. nesil muadili ile karşılaştırıldığında pahalıdır. Bu nedenle kamu sağlık kuruluşlarında ek tanı yöntemi olarak kullanılmaktadır. 3. test ücretsiz olarak yapılır, sonuçlarına göre kesin bir cevap vermek mümkün değilse hasta 4. nesil ELISA'ya gönderilir.

Önemli! Enfeksiyondan hemen sonra kişi bulaşıcı hale gelir. Teşhisini henüz bilmese bile başkaları için tehlikelidir!

ELISA sırasında HIV antijenlerine karşı antikorlar tespit edilirse, ek çalışmalar gereklidir. Bunlara ait. Bu yöntemin güvenilirliği %80'dir. PCR yardımıyla kan, meni ve vajinal akıntı incelenir. Biyolojik sıvı tıbbi bir reaktörde ayrıştırılır ve daha sonra enzim işlemine tabi tutulur. Sonuç olarak, sıvı bir ortamdaki HIV hücrelerinin konsantrasyonu hakkında veriler elde edilir. Pozitif bir sonuçla büyük hata (% 20) nedeniyle ek olarak immün lekeleme yapılır.

Bir sonraki teşhis adımı, Combo testidir (veya immün lekeleme). Bu oldukça hassas bir çalışmadır (%98 güvenirlik) ve ELISA sonuçları 6 ayda kesin değilse yapılmalıdır.

ELISA sonuçlarının yorumlanması

Şifre çözme süresi 24 ila 48 saat arasındadır. Acil olarak bilgi alınması gerekiyorsa (cerrahi müdahale gerekliyse) 2 saatte deşifre yapılır. İl tıbbi istasyonları her zaman gerekli reaktiflere sahip değildir. Numune dolaşım yerinde alınır, ardından bölge merkezine nakledilir. Bu gibi durumlarda, sonuç 1-2 hafta içinde öğrenilebilir.

Bir enzim immün testinin sonucu pozitif veya negatif olabilir; Başka seçenek yok.

Birincil ve tekrarlanan ELISA sırasında sonuç pozitif olsa bile, hasta HIV ile enfekte olarak tanınamaz. Olası hata. Yanlış pozitif sonucun nedenleri:

• kronik hastalıklar;
• uzun süreli bulaşıcı hastalıklar;
• gebelik.

Bu nedenle analiz sonucu ek çalışmalarla netleştirilmelidir.

HIV (reaktif) için immünoblotlama sırasında, bir kişinin HIV ile enfekte olduğu kabul edilirse, bu onun sağlıklı olduğu anlamına gelir.

Virüsün hücreleri sonunda reçete edilen ilaçlara uyum sağlar. Kontrol için ELISA testi periyodik olarak tekrarlanır.

Bazen immünoblotlama yanlış bir negatif sonuç gösterir. Son derece nadir immün yetmezlik virüsü 6 ay (veya daha fazla). Bu, kan dolaşımına az miktarda virüs hücresi girmişse mümkündür. Toplam vaka sayısının %0,5'inde enfeksiyon ancak bir yıl sonra teşhis edilebilmektedir. %99,5 oranında, enfeksiyondan sonraki altı ay içinde ELISA güvenilir bir sonuç verecektir.

Yüksek hassasiyetli çalışmalarda bile, hala %2'lik bir hata payı vardır. İnsan faktörünü unutmamalıyız. Hata olasılığını ortadan kaldırmak için test 2 farklı kurumda yapılabilir.