"ds-ifa-hbeAg" va "ds-ifa-anti-hbe" ferment immunoassay test tizimlari. NPO Diagnostic Systems MChJ tomonidan ishlab chiqarilgan test tizimlari Planshetni yuvish uchun talablar

1 Terishdan maqsad

1.1 To'plam bilvosita ferment usulidan foydalangan holda inson zardobida va qon plazmasida 1 va 2 turdagi (OIV-1 va OIV-2) va OIV-1 p24 antijeniga antikorlarni bir vaqtning o'zida aniqlash uchun mo'ljallangan. - bog'langan immunosorbent tahlili.

2 To'plamning xarakteristikasi va ishlash printsipi

2.1 Tarkibni o'rnatish:

Komponent nomi	Miqdori
Immunosorbent	2 tabletka
Ijobiy nazorat namunasi AT (K + AT)	1 shisha, 3 ml
Ijobiy AG nazorat namunasi (K + AG)	3 shisha, liyofillangan preparat
Salbiy nazorat namunasi (TO -)	3 ml dan 2 shisha
Konjugat eritmasi № 1 (RK-1)	1 shisha, 12 ml
Konjugat № 2 (Kg-2)	1 shisha, 1 ml
2-sonli konjugatni suyultirish uchun eritma (RR-K2)	18 ml dan 2 shisha
Substrat uchun bufer eritmasi ( BRS)	18 ml dan 2 shisha
Xromogen TMB	1 shisha, 1 ml
Tween bilan fosfat tampon tuz konsentrati (FSB-T×25)	50 ml dan 2 shisha
Reaktivni to'xtating	1 shisha, 12 ml
Ko'p kanalli pipetka uchlari bilan reagentli vannalar to'plami	1 to'plam
Yopishqoq plyonka

2.2 "ELISA-OIV 1,2 AGAT" to'plamining asosiy komponentlari immunosorbent, 1-sonli konjugat eritmasi va №2 konjugatdir.

Immunosorbent polistirol plitasi bo'lib, uning quduqlarida rekombinant OIV-1 (gp41) va OIV-2 (gp36) antijenlari va OIV-1 p24 antigeniga monoklonal antikorlar aralashmasi adsorbsiyalanadi.

Konjugat eritmasi № 1 OIV-1 p24 antijeni va biotin bilan belgilangan rekombinant OIV-1 va OIV-2 oqsillariga qarshi biotin bilan belgilangan inson monoklonal antikorlari aralashmasidir.

Konjugat № 2 Horseradish peroksidaza bilan konjugatsiyalangan streptavidindir.

Ijobiy nazorat namunasi AT- OIV-1 va OIV-2 ga antikorlarni o'z ichiga olgan, gepatit C virusiga va Treponema pallidumga, OIV-1 p24 antijeni va HBs antigeniga antikorlarni o'z ichiga olmaydi, 56 ºC haroratda 3 soat davomida qizdirilganda inaktivatsiyalangan inson qon zardobi.

Ijobiy AG nazorat namunasi- OIV-1, OIV-2, gepatit C virusi va Treponema pallidum va HBs antigeniga antikorlarni o'z ichiga olmaydi, 3 soat davomida 56 ºC haroratda qizdirilganda inaktivatsiyalangan, mahalliy OIV-1 p24 antigenini o'z ichiga olgan inson qon zardobi.

Salbiy nazorat namunasi- OIV-1, OIV-2, HCV, OIV-1 p24 antijeni va HBs antigeniga antikorlarni o'z ichiga olmaydi, 56 ºC haroratda 3 soat davomida qizdirilganda inaktivatsiyalangan inson qon zardobi.

To'plamning ishlash printsipi. Plastinka quduqlariga №1 konjugat eritmasi va infektsiyalangan qon zardobi namunalari qo'shilsa, p24 antijeni qattiq fazadagi o'ziga xos antikorlar bilan ham, monoklonal biotinillangan anti-p24 antikorlari bilan bog'lanadi. konjugat № 1; OIVga xos antitelalar qattiq fazada adsorbsiyalangan rekombinant OIV-1 va OIV-2 antigenlari bilan ham, 1-sonli konjugat eritmasiga kiritilgan antigenlar bilan ham bog‘lanib, antigen-antikor komplekslarini hosil qiladi. Anti-p24 o'ziga xos antikorlari va p24 antijenining immun komplekslari 2-sonli konjugat tomonidan aniqlanadi. Bog'lanmagan komponentlarni yuvgandan so'ng, plastinkaning quduqlariga peroksidaza substrati (vodorod periks) va TMB xromogen eritmasi qo'shiladi.

Peroksidaza reaktsiyasi to'xtatuvchi reagent (0,9 M sulfat kislota eritmasi) qo'shilishi bilan to'xtatiladi va quduqlardagi eritmaning rang intensivligi 450 nm to'lqin uzunligida optik zichlik (OD) qiymati sifatida spektrofotometrda o'lchanadi.

OD qiymati sarum yoki plazma namunasidagi o'ziga xos antikorlar va/yoki p24 antijeni konsentratsiyasiga to'g'ridan-to'g'ri proportsionaldir. Sarum namunasida antikor va/yoki p24 antijeni miqdori qanchalik yuqori bo'lsa, binoni intensivligi shunchalik yuqori bo'ladi.

2.3 To'plam amalga oshirish uchun mo'ljallangan 24 ta ishlab chiqarish ELISA: 1 to'plam - 1 tasma (8 teshik). Jami - 192 ta'riflar, shu jumladan nazorat namunalari.

3 To'plam bilan ishlashda ehtiyot choralari

3.1 To'plamning barcha tarkibiy qismlari ishlatilgan konsentratsiyalarda toksik emas. Shu bilan birga, potentsial infektsiyalangan deb hisoblanishi kerak bo'lgan, OIV, gepatit B virusi yoki virusli infektsiyaning boshqa qo'zg'atuvchisini saqlash va yuborishga qodir bo'lgan inson qon zardobining (plazmasining) barcha sinov namunalari, chiqindilar va suyuqliklar, turli xil asbob-uskunalar bilan ishlang. tahlil jarayonida ifloslangan bo'lishi mumkin, to'plamdan foydalanishda ma'lum xavfsizlik choralarini talab qiladi:

Ish maxsus jihozlangan xonada amalga oshirilishi kerak;

, , va talablariga muvofiq shaxsiy himoya vositalaridan foydalangan holda ishlash va ehtiyot choralarini ko'rish kerak.

3.2 Sulfat kislotasi bo'lgan reagentni to'xtating tirnash xususiyati beruvchi. Teri va shilliq pardalar bilan aloqa qilganda, darhol ko'p miqdorda suv bilan yuvib tashlang.

3.3 To'plam bilan ishlashda ish joylari ta'minot va egzoz ventilyatsiyasi bilan ta'minlanishi kerak.

3.4 To'plamlar bilan laboratoriyada ishlaydigan barcha shaxslar talablarga muvofiq majburiy tibbiy ko'rikdan o'tishlari kerak.

3.5 Yaroqlilik muddati o'tgan tibbiy chiqindilar va/yoki foydalanilmagan to'plamlarni utilizatsiya qilish talablarga muvofiq amalga oshirilishi kerak.

4 To'plam bilan ishlash qoidalari

4.1 Noto'g'ri natijalarga yo'l qo'ymaslik uchun sinov namunalari bakteriya ko'payishiga to'sqinlik qiladigan sharoitlarda tayyorlanishi va saqlanishi kerak. Agregatlangan sarum komponentlari yoki cho'kindini o'z ichiga olgan sarum namunalari 3000 rpm tezlikda (5-10) daqiqa davomida santrifüjlash orqali aniqlanishi kerak. Sarum namunalari (2-8) ° C haroratda 5 kundan ortiq bo'lmagan muddatda saqlanishi mumkin. Muzlatilgan namunalar (tercihen kamida minus 20 ° C haroratda) 1 yildan ortiq bo'lmagan muddatda saqlanishi mumkin. Namunalarni qayta-qayta muzlatish-eritish davrlaridan qochish kerak.

Shuni esda tutish kerakki, gemoliz, giperlipidemiya, bakterial o'sish, shuningdek, uzoq vaqt davomida muzlatishsiz saqlanadigan namunalar tahlil qilish uchun mos emas.

Natijalarning ishonchliligi quyidagi qoidalarga bog'liq:

Yaroqlilik muddati tugagandan so'ng to'plamdan foydalanishga, shuningdek, turli seriyalardagi to'plamlarning tarkibiy qismlarini aralashtirishga yo'l qo'yilmaydi;

Har bir reaktivni tayyorlash uchun alohida idishdan foydalanish kerak;

Reagentlarni tayyorlash uchun ishlatiladigan barcha idishlarni dezinfektsiyalash va yuvish vositalari bilan ishlov bermang. Agar kerak bo'lsa, ichimlik suvi bilan yuvib tashlang va keyin distillangan suv bilan besh marta yuving;

TMB va PX xromogen bilan ishlash uchun eritmalar, pipetka uchlari va idishlar uchun alohida idishlardan foydalanish kerak.

Reagentlarni yaxshilab aralashtirishga e'tibor berish kerak;

Plitaning quduqlarini eritmalar va reagentlar bilan to'ldirish va bo'shatish orasidagi vaqt kamida 30 s bo'lishi kerak. Elishayning barcha bosqichlarida quduqlarni quritishga yo'l qo'yilmaydi;

Kir yuvish mashinasidan foydalanganda, planshetni yuvish uchun eritma va ulash shlanglari uchun idishning holatini kuzatib boring: ular bakterial yoki qo'ziqorin o'sishi belgilarini ko'rsatmasligi kerak;

O'rtacha doza va pipetleme natijalarining izchilligi (xato 3% dan ko'p bo'lmagan) uchun sertifikatlangan, almashtiriladigan uchlari bo'lgan avtomatik pipetkalardan foydalanish kerak;

Dispenserlar va ishchi yuzalarni hajmi bo'yicha 70% etil spirti bo'lgan eritma bilan davolang. Xloramin yoki boshqa xlor o'z ichiga olgan moddalarni ishlatmang;

Sinov va nazorat namunalari bilan ishlash uchun bir martalik pipetka uchlaridan foydalanish tavsiya etiladi. Har bir sarum namunasi, shuningdek, reagentlar to'plami alohida uchi bilan to'planishi kerak.

Quduqlarga RK-1 qo‘shganda plastinka yuzasiga va quduqlardagi eritmaga pipetka uchi bilan tegmang.

Tahlil qilish vaqtida ish yuzasida to'g'ridan-to'g'ri quyosh nurlaridan qochish kerak.

4.2 Liyofillangan komponentlarni ochish va eritishda shishalarning qopqog'i va devorlarida quruq moddalar qolmasligini ta'minlash kerak.

5 Tahlil qilish uchun zarur bo'lgan asbob-uskunalar va materiallar

5.1 450 nm to'lqin uzunligida plastinka quduqlaridagi eritmalarning optik zichligini o'lchash imkonini beruvchi vertikal skanerlash spektrofotometri;

Tabletkalarni yuvish uchun yarim yoki avtomatik qurilma (yuvish mashinasi);

TS-80 M2 tipidagi quruq havo termostati, (37±1) °C haroratni yoki unga o'xshash xususiyatlarni saqlaydi;

0,01 dan 5,0 ml gacha suyuqlik hajmini olish imkonini beruvchi almashtiriladigan uchli bitta kanalli avtomatik pipetkalar;

0,5 ml gacha suyuqlik hajmini olish imkonini beruvchi almashtiriladigan uchli 8 kanalli avtomatik pipetkalar;

2000 ml hajmli o'lchash tsilindri;

2000 ml hajmli laboratoriya kolbasi;

20 ml hajmli shisha idishlar;

Reagentlar yoki Petri idishlari uchun tovoqlar (diametri 100 mm);

Tibbiy gigroskopik paxta momig'i;

Filtr qog'ozi;

rezina jarrohlik qo'lqoplar;

Etil spirtining hajm ulushi 70% bo'lgan eritma;

Vodorod periksning massa ulushi 6% bo'lgan eritma;

Deionlangan yoki distillangan suv;

Qattiq chiqindilarni yig'ish uchun konteyner;

Suyuq chiqindilarni to'kish uchun idish.

6 Tahlilga tayyorgarlik

6.1 Tahlil qilishdan oldin reaktiv to'plamini muzlatgichdan olib tashlang, qutining qopqog'ini oching va to'plamning tarkibiy qismlarini haroratda saqlang. (18-25) °C 30 daqiqa davomida.

Sinovdan oldin barcha sarum (plazma) namunalari va reagentlarni yaxshilab aralashtiring.

Ishlatilgan chiziqlar soniga qarab belgilanadigan sinov to'plamidagi reaktivlar iste'moli A ilovasining A.1-jadvalida keltirilgan.

6.2 Plastinani yuvish uchun eritma tayyorlash

Diqqat! Tahlil boshlanishidan 15 daqiqa oldin plastinkani yuvish uchun eritma tayyorlang!

Agar FSB-T×25 bo'lgan shishada cho'kma bo'lsa, uni ishlatishdan oldin cho'kindi to'liq eriguncha (37±1) °C haroratda qizdirilishi kerak. FSB-T×25 shishasining tarkibini 2000 ml sig‘imli o‘lchash tsilindriga soling, so‘ng belgiga distillangan suv qo‘shing. 1250 ml va eritmani ehtiyotkorlik bilan aralashtiring. Eritma (2-8) ° C haroratda 72 soat davomida saqlanishi mumkin.

Agar bir yoki bir nechta chiziqlar ishlatilsa, FSB-T×25 bilan shishaning tarkibini (20-30) soniya davomida kuchli silkiting, kerakli hajmdagi eritmani (A.1-jadval) o'lchov stakaniga yoki silindrga oling, kerakli miqdorda distillangan suv va eritmani aralashtiramiz. Foydalanilmayotgan FSB-T×25 to'plamning yaroqlilik muddati davomida yopiq shishada (2-8) °C haroratda saqlanishi mumkin.

6.3 Immunosorbentni tayyorlash

Immunosorbent foydalanishga tayyor.

Paketni oching va kerakli miqdordagi chiziqlarni ramkaga o'rnating. Qolgan chiziqlar 3 oy davomida (2-8) ° C haroratda qurituvchi bilan mahkam yopilgan sumkada saqlang.

6.4 K + AT, K –, RK-1, RR-K2, BRS va to'xtatuvchi reaktivni tayyorlash

K + AT, K – , RK-1, RR-K2, BRS va to'xtatuvchi reagent foydalanishga tayyor.

Diqqat! RK-1 bilan shishada yog'ingarchilik paydo bo'lishi mumkin. Tahlil qilish uchun supernatant suyuqlik ishlatilishi kerak.

Ishlatilmagan RK-1, RR-K2, BRS va flakonlarni ochgandan keyin to'xtatuvchi reagentlar to'plamning yaroqlilik muddati davomida (2-8) °C haroratda yopiq flakonlarda saqlanishi mumkin.

Qolgan K + AT va K - flakon ochilgandan so'ng, to'plamning yaroqlilik muddati davomida (2-8) ° C haroratda yopiq flakonlarda saqlanishi mumkin.

6.5 K + AG eritmasini tayyorlash

Diqqat! Tahlil boshlanishidan 15 daqiqa oldin K + AG eritmasini tayyorlang!

Liyofillangan K + AG ni tiklash uchun shishani ochishdan oldin shisha yoki tiqin devorlariga yopishgan zarrachalarni silkitish uchun ozgina teging. Shishani oching va tiqinni quruq yuzaga teskari qo'ying. Shishaga 0,8 ml distillangan suv qo'shing. Shishani tiqin bilan yoping, (18-25) °C haroratda 10 daqiqa ushlab turing va shishani ehtiyotkorlik bilan egib, aylantiring, ko'pik hosil bo'lishiga yo'l qo'ymasdan, uning tarkibini to'liq eriguncha aralashtiring.

Kamaytirilgan K + AG yopiq shishada (2-8) °C haroratda bir oy davomida, minus 20 °C haroratda olti oy davomida saqlanishi mumkin. Kamaytirilgan K + AG ning bir marta muzlatish-erishiga ruxsat beriladi.

6.6 Ishchi suyultirishda Kg-2 eritmasini tayyorlash

Kg-2 bo'lgan shishadan A.1-jadvalda ko'rsatilgan hajmni oling va uni PP-K2 bilan shishaga o'tkazing. Shishaning tarkibini yaxshilab aralashtiramiz, ko'pik paydo bo'lishidan qoching.

Agar siz bir yoki bir nechta chiziqlardan foydalansangiz, kerakli miqdordagi PP-K2 ni toza shishaga soling, A.1-jadvalga muvofiq Kg-2 qo'shing va ko'pik hosil bo'lishiga yo'l qo'ymaslik uchun eritmani aralashtiring.

Diqqat! Ishchi suyultirishdagi Kg-2 eritmasi ishlatishdan oldin darhol tayyorlanadi! Ishchi suyultirishdagi Kg-2 eritmasi (18-25) ° S haroratda 15 daqiqa davomida saqlanishi mumkin. Faqat yangi reagent vannasi va yangi maslahatlardan foydalaning!

Kg-2 ning qolgan qismi yopiq flakonda (2-8) °C haroratda to'plamning yaroqlilik muddati davomida saqlanishi mumkin.

6.7 Ishchi substrat eritmasini tayyorlash

TMB xromogenli shishani ishlatishdan oldin (37±1) haroratda isitish kerak.° Kristallar butunlay erimaguncha.

TMB xromogenli shishadan A.1-jadvalda ko'rsatilgan hajmni oling va uni BRS bilan shishaga o'tkazing. Shishaning tarkibini yaxshilab aralashtiramiz, ko'pik paydo bo'lishidan qoching.

Agar bir yoki bir nechta chiziqlar ishlatilsa, kerakli miqdordagi BRS ni toza shishaga soling, A.1-jadvalga muvofiq TMB xromogenini qo'shing va ko'pik hosil bo'lishiga yo'l qo'ymaslik uchun eritmani aralashtiring.

Diqqat! Substratning ishchi eritmasi yorug'likdan himoyalangan joyda ishlatishdan oldin darhol tayyorlanadi! Eritma 20 daqiqa davomida (18-25) ° C haroratda yorug'likdan himoyalangan joyda saqlanishi mumkin.

Eritma yorug'likdan va metallar yoki metall ionlari bilan aloqa qilishdan himoyalangan bo'lishi kerak. Foydalanishdan oldin substrat eritmasi rangsiz bo'lishi kerak. Reaksiya jarayonida substrat eritmasi bilan aloqa qiladigan idishlarni sintetik yuvish vositalaridan foydalanmasdan yuvish kerak. Faqat yangi reagent vannasi va yangi maslahatlardan foydalaning!

TMB xromogenining qolgan qismi yopiq flakonda (2-8) °C haroratda to'plamning amal qilish muddati tugaguncha saqlanishi mumkin.

7 Plastinani yuvish uchun talablar

Yuvishning barcha bosqichlarida barcha quduqlarni to'ldirishni va ulardan suyuqlikning to'liq chiqarilishini (aspiratsiyasini) nazorat qilish kerak;

Har bir yuvishda barcha quduqlarni eritma bilan to'ldirish kerak (har bir quduq uchun 0,30-0,35 ml), qo'shni quduqlardan suyuqlikni to'ldirib yoki to'ldirib yubormasdan;

Plitani yuvish uchun eritma bilan to'ldirilgan quduqlarni 30 soniya davomida ushlab turish kerak;

Har bir aspiratsiya paytida, polietilen varag'iga joylashtirilgan, bir necha marta katlanmış filtr qog'oziga teskari holatda chiziqlar bilan ramkaga tegib, quduqlardan qoldiq suyuqlikni ehtiyotkorlik bilan olib tashlang;

Plitaning yomon yuvilishi noto'g'ri natijalarga olib keladi.

8 Tahlil o'tkazish

8.1 Plastinaning har qanday ikkita qudug'iga quying 0,07 ml(70 mkl) K + AT, boshqa ikkita teshikda - har biri 0,07 ml(70 mkl) K + AG, qolgan uchta teshikda - har biri 0,07 ml(70 mkl) TO - .

Diqqat! Bir chiziqda ELISA ni o'tkazishda K – - uchun ikkita quduq, K + AT uchun bitta quduq va K + AG uchun bitta quduqdan foydalanishga ruxsat beriladi.

Plitaning qolgan quduqlariga quying 0,07 ml(70 mkl) inson qon zardobining (plazma) o'rganilgan namunalari.

Diqqat! Har bir namunani bir martalik uchi bilan yig'ish kerak!

8.2 Plitaning barcha quduqlarida nazorat namunalari va qon zardobining (plazma) sinov namunalari tepasida. to'g'ridan-to'g'ri tomonidan depozit 0,05 ml(50 mkl) RK-1. Plitaning chetlarini muloyimlik bilan urib, quduqlarning tarkibini aralashtiring.

8.3 (37 ± 1) ° Ichkaridan 60 min.

Diqqat! Inkubatsiya tugashiga (1-2) daqiqa qolganda, ishchi suyultirishda Kg-2 eritmasini tayyorlang (6.6-bo'lim).

8.4 Quduqlarning tarkibini yuvish vositasi yordamida olib tashlang, so'ngra plastinkaning quduqlarini plastinkani yuvish uchun eritma bilan yuving (6.2-bo'lim). etti marta.

8.5 Plitaning barcha quduqlariga quying 0,15 ml(150 mkl) eritma kg-2 ishchi suyultirishda (6.6-band).

8.6 Plastinani plyonka bilan yoping yoki qopqoq bilan yoping va haroratda termostatda inkubatsiya qiling (37 ± 1) ° Ichkaridan 10 min.

8.7 Plastinka quduqlarining tarkibini yuvish vositasi yordamida olib tashlang, so'ngra plastinka quduqlarini plastinka yuvish eritmasi bilan yuving (6.2-bo'lim). etti marta.

8.8 Plitaning barcha quduqlariga quying 0,15 ml(150 mkl) substratning ishchi eritmasi(6.7-band).

Substratning ishchi eritmasini tayyorlashda (6.7-band) f TMB xromogenli lakni ishlatishdan oldin (3-5) daqiqa davomida (37) haroratda qizdirilishi kerak.± 1) ° C, kristallar to'liq eriguncha.

8.9 Plastinani plyonka bilan yoping yoki qopqoq bilan yoping va haroratda termostatda inkubatsiya qiling (37 ± 1) ° BILAN yorug'likdan himoyalangan joyda 15 daqiqa.

Diqqat! OIV-1 va/yoki OIV-2 va/yoki OIV-1 p24 antijeni antikorlari bo'lgan sarum namunalari bo'lgan quduqlarda inkubatsiya oxirida eritmaning rangi konsentratsiyaga qarab rangsizdan ko'k ranggacha o'zgaradi. tekshirilayotgan sarum namunasidagi antikorlar va/yoki antigenlar.

8.10 Qo'shish orqali peroksidaza reaktsiyasini to'xtating 0,05 ml(50 mkl) reaktivni to'xtating.

Diqqat! OIV-1 va/yoki OIV-2 va/yoki OIV-1 p24 antijeni antikorlari bo'lgan sarum namunalari bo'lgan quduqlarda eritma rangi har xil intensivlikdagi ko'kdan sariq ranggacha o'zgaradi.

8.11 Reaksiyani to'xtatgandan keyin (1-2) minutdan kechiktirmay, to'lqin uzunligida bir to'lqinli rejimda quduqlardagi ODni aniqlang. 450 nm.

9 Tahlil natijalarini qayta ishlash

9.2 Natijalar faqat quyidagi hollarda hisobga olinadi:

OPsr K qiymati - 0,2 OE dan oshmaydi;

OP K ning har bir individual qiymati - OPsr K dan 30% dan ortiq chetga chiqmasligi kerak. Agar OP K ning uchta qiymatidan biri bu chegaradan oshib ketsa, u OPsr K - ni hisoblashdan chiqarib tashlanishi kerak. Agar uchta OD K - qiymatlaridan ikkitasi ushbu chegaradan tashqarida bo'lsa, tahlilni yangi to'plamning reagentlari yordamida takrorlash kerak;

OPsr K + AT qiymati 1,0 OE dan ortiq;

OPsr K + AG qiymati 1,0 OU dan ortiq.

9.3 Agar yuqoridagi shartlar bajarilsa, (1) formuladan foydalanib, kritik qiymatni (OPcrit.), OE ni hisoblang:

OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).

10 Analitik va diagnostik xarakteristikalar

Sezuvchanlik reaktivlar to'plami ELISA-OIV 1.2 AGAT OIV-1 p24 antijenini aniqlash uchun -

O'ziga xoslik reaktivlar to'plami ELISA-OIV 1.2 AGAT– 100% AT(-)OIV standarti. Odamning immunitet tanqisligi virusining 1 va 2-toifalari (OIV-1,2) va OIV-1 (p24) antijenlariga antikorlarni o'z ichiga olmaydi standart sarumlar paneli OCO42-28-214-02P.CatNo.INS-20. "MBS" YoAJ

11 Chiqarish shaklini o'rnating

11.1 To'plam beshta konfiguratsiya variantida mavjud:

1P to'plami - qo'lda tahlil qilish. To'plam yig'iladigan plastinkada ELISA 12 ta o'rnatishni amalga oshirish uchun mo'ljallangan: 1 yugurish - 1 tasma (8 quduq). Jami – 96 ta aniqlash, shu jumladan nazorat namunalari;

2 to'plam 2M - qo'lda tahlil qilish. To'plam monolit plitalarda 2 ta Elishay testini o'tkazish uchun mo'ljallangan: 1 ta sinov - 1 ta plastinka. Jami – 192 ta aniqlash, shu jumladan nazorat namunalari;

3 2P o'rnating- tahlilni qo'lda o'tkazish. To'plam amalga oshirish uchun mo'ljallangan 24 ta ishlab chiqarish 2 uchun ELISA yechib olinadigan x tabletkalar: 1 ta o'rnatish - 1 tasma (8 quduq). Jami - 192 ta'riflar, shu jumladan nazorat namunalari;

4 to'plam A2M - avtomatik analizatorda tahlil qilish. To'plam monolit plitalarda 2 ta Elishay testini o'tkazish uchun mo'ljallangan: 1 ta sinov - 1 ta plastinka. Jami – 192 ta aniqlash, shu jumladan nazorat namunalari;

5 A2P to'plami - avtomatik analizatorda tahlil qilish. To'plam 2 ta yig'iladigan plastinada 24 ta ELISA o'rnatishni amalga oshirish uchun mo'ljallangan: 1 yugurish - 1 tasma (8 quduq). Hammasi bo'lib 192 ta aniqlash, shu jumladan nazorat namunalari.

12 To'plamni saqlash va ishlatish shartlari

12.1 To'plam butun raf muddati davomida namlik va yorug'likdan himoyalangan toza xonada (2-8) ° C haroratda saqlanishi kerak. To'plam komponentlarini muzlatib qo'ymang.

12.2 Ishonchli natijalarga erishish uchun to'plamdan foydalanish bo'yicha ko'rsatmalarga qat'iy rioya qilish kerak.

12.3 To'plamning amal qilish muddati - 12 oy.

Ilova A

Jadval A.1 - Elishay to'plami uchun reagentlar iste'moli

reaktiv, ml

Ishlatilgan chiziqlar soni, dona.

Planshetni yuvish uchun eritma tayyorlash

FSB-T×25

Distillangan suv

Ishchi suyultirishda Kg-2 eritmasini tayyorlash

RR-K2

Ishchi substrat eritmasini tayyorlash

Xromogen TMB

Bibliografiya

	Sanitariya qoidalari	Belarus Respublikasi Sog'liqni saqlash vazirligining 1998 yil 16 dekabrdagi 351-son buyrug'i. OIV/OITS bilan bog'liq masalalarni tartibga soluvchi idoraviy normativ hujjatlarni qayta ko'rib chiqish to'g'risida
	Belarus Respublikasi Sog'liqni saqlash vazirligining 2002 yil 25 noyabrdagi 165-son buyrug'i. Sog'liqni saqlash muassasalari tomonidan dezinfeksiya va sterilizatsiya to'g'risida
	Belarus Respublikasi Sog'liqni saqlash vazirligining 2010 yil 28 apreldagi 47-son qarori. Xodimlarni majburiy tibbiy ko'rikdan o'tkazish va Belarus Respublikasi Sog'liqni saqlash vazirligining ayrim qarorlarini o'z kuchini yo'qotgan deb topish tartibi to'g'risidagi yo'riqnomani tasdiqlash to'g'risida

Tananing holatini har tomonlama baholash uchun Elishay diagnostika usuli qo'llaniladi. Enzim immunoassay qon testi yuqumli, gematologik, birlamchi va ikkilamchi immunitet tanqisligini tashxislash uchun mo'ljallangan.

Elishay tahlili nima

Ko'pgina bemorlar Elishay usuli bilan qiziqishadi: bu nima, nima uchun tadqiqot olib borilmoqda. Ferment immunoassaylari nisbatan yaqinda qo'llanila boshlandi. Dastlab, u antigen tuzilmalarni o'rganish uchun ishlatilgan va u faqat ilmiy maqsadlarda amalga oshirilgan. Keyin olimlar fermentlar yordamida davom etayotgan kasallikka javoban paydo bo'ladigan o'ziga xos antikorlarni aniqlash mumkin degan xulosaga kelishdi.

Dastlab, bu usul faqat yuqori ixtisoslashgan tibbiyot muassasalari tomonidan, asosan, qon quyish stantsiyalarida ishlatilgan. OIV infektsiyasini aniqlash uchun Elishay usuli alohida ahamiyatga ega.

Bugungi kunda bu usul keng qo'llanilishiga ega. Zamonaviy laboratoriyalar diagnostika uchun foydalanadilar:

• o'smalar;
• gormonal buzilishlar;
• infektsiyalar;
• surunkali yoki oldingi yuqumli jarayonlar;
• gelmintlar.

Agar tanada yuqumli jarayon sodir bo'lsa, unda bu turdagi tashxis kasallikning turini aniqlash uchun eng maqbul hisoblanadi.

Usulning mohiyati va uning turlari

Elishay usuli - bu nima, bu turdagi tadqiqotning mohiyati nimada? Bu va boshqa ko'plab savollar bemorlarni qiziqtiradi. Ushbu diagnostika usulining asosi tananing immunitet hujayralarini yuqumli agentlarning antijenlariga bog'lash hisoblanadi. Olingan kompleks maxsus ferment yordamida aniqlanadi.

Elishay usuli printsipini tushunish uchun siz antigen-antikor reaktsiyasi qanday sodir bo'lishini bilishingiz kerak. Antigen - bu infektsiya bilan birga kirib boradigan tanaga begona oqsil molekulasi. Guruhga mos kelmaydigan boshqa birovning qon zarralari ham antijenler hisoblanadi. Tanada ular begona moddalardan himoya qilishga qaratilgan immunitet reaktsiyasini qo'zg'atadilar. Shuning uchun inson tanasi antikorlarni - immunoglobulinlarni ishlab chiqaradi, ular antijenlarga biriktira oladi, immun kompleks hosil qiladi. Bunday birikmalarni immunitet hujayralari tomonidan tanib olish va yo'q qilish ancha oson.

Bunday immun komplekslarning mavjudligiga reaktsiya laboratoriya sharoitida, qonda shunga o'xshashlar mavjudligini aniqlash uchun tayyor birikmalar yordamida amalga oshiriladi.

Elishay usulining mohiyati juda oddiy, ammo ko'plab infektsiyalar va kasalliklarni aniqlash uchun qon testi o'tkazilishi tufayli uning bir nechta navlari mavjud. Ularning har biri o'zining amalga oshirish sxemasi va ko'lami bilan farq qiladi. To'g'ridan-to'g'ri yoki bilvosita Elishay bo'lishi mumkin. To'g'ridan-to'g'ri usul antijenler bilan reaksiyaga kirishadigan immobilizatsiyalangan antikorlardan foydalanishni nazarda tutadi. Ushbu usulning asosiy afzalligi shundaki, barcha jarayonlarni avtomatlashtirish mumkin, ya'ni diagnostika oz vaqtni oladi.

Bilvosita usul ikkilamchi antikorlardan foydalanishni nazarda tutadi. Va qattiq fazada antigen immobilizatsiya qilinadi. Tahlil turli antijenlarga antikorlarni aniqlash imkonini beradi. Bu aniqroq natijaga erishishga yordam beradi, ammo usul murakkab.

Tadqiqotning afzalliklari

Elishay usuli boshqa diagnostika usullariga nisbatan juda ko'p afzalliklarga ega. Asosiylariga quyidagilar kiradi:

• yuqori sezuvchanlik;
• ingredientlarni saqlash barqarorligi;
• diagnostika tezligi;
• oz miqdorda sinov materialidan foydalanish mumkin;
• barcha jarayonlarni avtomatlashtirish mumkin;
• infektsiyani eng erta bosqichlarda aniqlash mumkin.

Ushbu diagnostika usuli universaldir va shuning uchun ommaviy tekshirish uchun javob beradi. Tahlil yordamida yuqumli jarayonning dinamikasini kuzatish mumkin.

Tahlil va materiallarni yig'ish uchun ko'rsatmalar

Agar ko'plab kasalliklarga shubha bo'lsa, Elishay usuli yordamida tadqiqot buyurilishi mumkin:

Antikorlarning mavjudligi uchun venoz qon tekshiriladi. Tahlil qilishdan oldin tadqiqotni murakkablashtirishi mumkin bo'lgan elementlar undan ajratiladi. Boshqa biologik suyuqliklar ham to'planishi mumkin.

Eng aniq ma'lumotni olish uchun qon namunasi och qoringa amalga oshiriladi. Agar protsedura yashirin infektsiyani aniqlash uchun buyurilgan bo'lsa, testdan bir necha hafta oldin siz antibakterial va antiviral preparatlarni qabul qilishni to'xtatishingiz kerak. Materiallar yig'ilgan laboratoriya jihozlariga qarab, natijani 24 soat ichida olish mumkin. Favqulodda holatlarda bu vaqt bir necha soatgacha qisqartiriladi.

Sifilis uchun test

Elishay usulidan foydalanish tanadagi ko'plab infektsiyalar, xususan, sifilis mavjudligini aniqlashga yordam beradi. Tadqiqotni o'tkazish uchun qon och qoringa venadan olinadi. Keyin tanadagi kasallikning mavjudligini emas, balki uning boshlanishining aniq vaqtini ham aniqlashga yordam beradigan tadqiqot o'tkaziladi, chunki kasallik davrida ba'zi antikorlar qat'iy belgilangan tartibda boshqalar bilan almashtiriladi.

Kasallikning uzoq davom etishini ko'rsatadigan o'tkir bosqichda yoki surunkali infektsiyaning kuchayishi paytida qonda M tipidagi immunoglobulinlar aniqlanadi.A tipidagi immunoglobulinlarning mavjudligi infektsiyaning organizmda ko'proq vaqt davomida yashaganligini ko'rsatadi. 4 haftadan ortiq. G guruhining immunoglobulinlari kasallikning balandligini yoki oldingi terapiyani ko'rsatadi.

Yuqumli jarayonning intensivligi teshiklarning rang berish darajasi bilan baholanadi, chunki uning to'yinganligi hosil bo'lgan immun komplekslar soniga bog'liq.

OIV infektsiyasi uchun test

Tahlil qilish uchun Elishay usuli ham qo'llaniladi, bu holda u kasallikning borishi va rivojlanishi bilan bog'liq bo'lgan ma'lum xususiyatlarga ega. Ushbu tadqiqot usuli aniqlash uchun eng maqbul deb hisoblanadi, ammo u xavf omillari ta'siridan keyin bir oydan kechiktirmay amalga oshirilishi kerak. Bu 45 kundan 6 oygacha davom etadigan inkubatsiya davrining mavjudligi bilan bog'liq. Shuning uchun tahlilni olti oydan keyin takrorlash kerak.

• askarioz;
• lyamblioz;
• toksoplazmoz va boshqalar.

Barcha afzalliklarga qaramay, Elishay usulining kamchiliklari ham mavjud. Asosiy kamchilik shundaki, tadqiqot o'tkazayotganda shifokor kasallik haqida oldindan taxminga ega bo'lishi kerak.

Agar tasodifan patogenni topish va uning immunoenzim xususiyatlarini aniqlash mumkin bo'lmasa. Sinov faqat bemorning qonida antikorlar mavjudligini ko'rsatadi. Bundan tashqari, bu juda qimmat tahlil.

Tahlil transkripti

Yuqori sifatli Elishayning natijasi qonda antikorlarning mavjudligi yoki ularning yo'qligi bo'ladi. Agar miqdoriy tahlil o'tkazilsa, antikor kontsentratsiyasi raqamli qiymat sifatida yoki ma'lum miqdordagi + belgilarida ifodalanishi mumkin.

Bundan tashqari, ko'rsatkichlar:

IgM indikatori tanadagi o'tkir yuqumli jarayonning paydo bo'lishini ko'rsatadi. Uning to'liq yo'qligi kasallikning qo'zg'atuvchisi yo'qligini yoki uning surunkali bosqichga o'tishini ko'rsatishi mumkin.

IgM testining salbiy natijasi bilan IgA ko'rsatkichi surunkali yoki yashirin infektsiyani ko'rsatadi. IgM va IgA ning bir vaqtning o'zida mavjudligi kasallikning o'tkir bosqichda ekanligini ko'rsatadi. IgG mavjudligi kasallikning surunkali bosqichga o'tishini yoki immunitetning to'liq tiklanishini va rivojlanishini ko'rsatadi.

Endi siz o'zingiz qilishingiz mumkin bo'lgan maxsus ELISA testlari mavjud.

S.N. IGOLKINA, V.F. PUZYREV, L.G. ZININA, N.M. DENISOVA, A.N. BURKOV,

A.P. RITE, T.I. ULANOVA
"Diagnostika tizimlari" ilmiy-ishlab chiqarish birlashmasi MChJ,

Nijniy Novgorod
O'tkir va surunkali gepatit B ning maxsus diagnostika va natijalarini bashorat qilish uchun "DS-ELISA-HBeAg" va "DS-ELISA-anti-HBe" ELISA IMMUNO TEST TIZIMLARI
Gepatit B virusli yuqumli kasallik bo'lib, og'ir xarakterlanadi

yallig'lanishli jigar shikastlanishi. O'limlarning taxminan 1% ga to'g'ri keladi

kasallikning o'tkir davri, 4-10% hollarda surunkali holatga o'tish kuzatiladi

keyingi jigar sirrozi va birlamchi shakllanishi mumkin bo'lgan jarayon

gepatokarsinomalar.

O'tkir gepatit B bilan kasallanishning kamayish tendentsiyasiga qaramay, birinchi marta surunkali virusli gepatit tashxisi qo'yilgan bemorlarning epidemiologik xavfli guruhi, shuningdek kasallikning qo'zg'atuvchisi tashuvchilari guruhi shakllanishda davom etmoqda. . Reproduktiv yoshdagi aholi, shuningdek, o'smirlar orasida gepatit B bilan kasallanishning yuqori darajasi tufayli noqulay prognoz saqlanib qolmoqda.

SHuning uchun hozirgi vaqtda gepatit B ni davolash, oldini olish va diagnostika masalalari ayniqsa dolzarbdir.Hozirgi vaqtda bu infeksiyaning markerlarini aniqlashda ferment bilan bog'liq immunosorbent tahlil usullari keng qo'llanilmoqda. HBV ning eng muhim serologik belgilariga e-antigen (HBeAg) va e-antigenga (anti-HBe) antikorlar kiradi. HBeAg yuqori qon kontaminatsiyasi bilan bog'liq bo'lib, gepatit B virusining (HBV) faol replikatsiyasini ko'rsatadi. HBeAg ning yuqori titrlari yuqori DNK polimeraza faolligiga mos kelishi va har doim to'liq Dane zarralarini aniqlash bilan birlashtirilganligi aniqlandi. HBeAg o'z ichiga olgan zardob sog'lom odamning qoniga kirganda, infektsiya xavfi serokonversiya sodir bo'lganidan keyin ko'p marta yuqori bo'ladi.

O'tkir gepatit Bda HBeAg qonda yuqumli jarayonning dastlabki bosqichlarida, kasallikning birinchi klinik ko'rinishida, HBsAg ko'rinishidan bir hafta orqada qoladi. Tsiklik kursning o'tkir gepatiti B (AHB) HBeAg ning qisqa muddatli aylanishi bilan tavsiflanadi. Ko'p o'tmay, ikterik davrning 2-3 xaftasida anti-HBe paydo bo'ladi, bu kasallikning ijobiy natijasini taxmin qilish imkonini beradi.

Anti-HBe qonda 2-5 yil, kamroq tez-tez bir necha oy davomida aylanadi.

HBeAg-antiHBe serokonversiyasining boshlanishi faollikning keskin pasayishini ko'rsatadi

yuqumli jarayon. Kasallikning 2 oyligidan keyin bemorlarning qonida HBeAg ning aniqlanishi patologik jarayonning surunkaliligini ko'rsatadi. Bunday holda, anti-HBe HBcAg ga antikorlar paydo bo'lganidan keyin ko'p yillar o'tgach paydo bo'lishi yoki umuman aniqlanmasligi mumkin.

Anti-HBe ko'rinishi noqulay prognostik ahamiyatga ega bo'lishi mumkin

bilan oldingi yadro zonasida mutatsiyaga mos keladigan og'ir shakllarda HBVning o'tkir davri

HBV "e-" shtammini shakllantirish.

Maqsad Bu ish juda sezgir va o'ziga xos rivojlanish edi

HBeAg va anti-HBe ni aniqlash va ularning asosiy xususiyatlarini baholash uchun ferment immunoassay test tizimlari.

Materiallar va usullar.

1. "DS-ELISA-HBeAg" ferment immunosorbent test tizimi. Testning haqiqiy boshlanishi

NPO Diagnostic Systems, Nijniy Novgorod tomonidan ishlab chiqarilgan, qattiq fazaga adsorbsiyalangan rekombinant HBeAg ga poliklonal echki antikorlari va NPO Diagnosty Novg tomonidan ishlab chiqarilgan rekombinant HBeAg ga poliklonal echki antikorlari bo'lgan konjugat, xren peroksidazasi bilan etiketlanadi. Tahlil sxemasi bir bosqichli “sendvich”dir.Jami reaksiya vaqti 1,5 soat. Sarum namunasi suyultirilmagan holda tahlil qilinadi.

2. "DS-ELISA-anti-HBe" ferment immunosorbent test tizimi. Sinovning asosi

NPO Diagnostic Systems tomonidan ishlab chiqarilgan rekombinant HBeAg (AHBV 102),

Nijniy Novgorod, qattiq fazada sorbsiyalangan va xren peroksidaza bilan anti-IgG konjugati, Sorbent Service, Moskva tomonidan ishlab chiqarilgan. Reaktsiya ikki bosqichda sodir bo'ladi. Sinov zardobi immobilizatsiyalangan antigenga 1/10 suyultirilganda qo'shiladi va inkubatsiyadan va bog'lanmagan komponentlar olib tashlanganidan so'ng, sichqonchaning monoklonal antikorlari yordamida o'ziga xos immunokomplekslar, horseradish peroksidaza bilan etiketlangan odam IgG ga qarshi aniqlanadi.

3. Ishlab chiqilgan test tizimlarini baholash uchun 2178 ta sarum namunalari ishlatilgan

qon. Ulardan 480 tasi sog'lom donorlardan olingan sarum namunalari edi. 1680 ta namunadir

gepatit B virusining turli belgilarini o'z ichiga olgan qon zardobi namunalari.

Vaqt o'tishi bilan o'tkir virusli gepatit B klinik tashxisi bo'lgan bemorlardan o'n sakkizta namuna olindi. Ilgari barcha namunalar NPO Diagnostic Systems, Nijniy Novgorod tomonidan ishlab chiqarilgan test tizimlari yordamida HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc mavjudligi uchun sinovdan o'tkazildi: "ELISA-HBsAg / m", "DS-ELISA-HBeAg", " DS-ELISA-anti-HBe", "ELISA-anti-HBc".

4. Foydalanilgan holda ishlab chiqilgan test tizimlarini qiyosiy baholash amalga oshirildi

BIO-RAD, Frantsiya tomonidan ishlab chiqarilgan "Monolisa HBe" tijorat preparati;

Natijalar va muhokama."Diagnostika tizimlari" NPO 2 ta yangi diagnostika to'plamini ishlab chiqdi: "DS-ELISA-HBeAg" va "DS-ELISA-anti-HBe". "DS-ELISA-HBeAg" test tizimi ferment bilan bog'langan immunosorbent tahlil yordamida inson zardobida (plazmasi) gepatit B virusining elektron antijenini aniqlash uchun mo'ljallangan va yuqumli kasallikning faolligini aniqlash uchun maxsus diagnostika uchun ishlatilishi mumkin. jarayon, gepatit B ning og'irligi va oqibatlarini bashorat qilish.

“DS-ELISA-anti-HBe” test tizimi inson qon zardobidagi (plazmasi) gepatit B virusining e-antigeniga IgG antikorlarini aniqlash uchun mo'ljallangan va

yuqumli jarayonning borishini bashorat qilish va gepatit B uchun terapiyani kuzatish uchun ishlatiladi.

Yangi testlarning o'ziga xosligini o'rganish uchun taqsimot baholandi

o'z ichiga olgan va bo'lmagan qon zardobi namunalarining optik zichligi (OD).

HBeAg yoki anti-HBe. Sog'lom donorlarning qon zardobi namunalari va gepatit B virusining turli belgilari uchun tanlangan qon zardobi namunalari ishlatilgan.

qon quyish stantsiyalari. Tadqiqot natijalari ikki populyatsiyaning sezilarli darajada ajralishini ko'rsatdi. HBeAg ni o'z ichiga olmagan sarum namunalarining OD qiymatlari 0,011 dan 0,111 gacha va HBeAg o'z ichiga olgan sarum namunalarining asosiy cho'qqisi 2,186 dan 3,186 gacha (1a-rasm).

1a-rasm. O'z ichiga olgan va bo'lmagan sarum namunalarining OD taqsimotiHBeAgtest tizimida "DS-IFA-HBeAg»
Past OD (0,3-0,6) bo'lgan sarumlar guruhiga to'g'ri keladigan cho'qqi, ehtimol, yuqumli jarayonning dastlabki bosqichlarida to'plangan sarum namunalaridan iborat.

Inkubatsiya davrida allaqachon HBsAg va HBeAg bemorlarning qonida tabiiy ravishda qayd etilgan, bu ularning potentsial epidemiologik xavfini tasdiqlaydi.

Anti-HBe bo'lmagan sarum namunalarining optik zichligi diapazoni

0,002 dan 0,122 gacha bo'lgan diapazonda bo'lgan va anti-HBe o'z ichiga olgan sarum namunalarining asosiy cho'qqisi OD 2,431 dan 3,231 gacha (1b-rasm).

Guruch. 1b. Anti-H ni o'z ichiga olgan va o'z ichiga olmagan sarum namunalarining OD taqsimotiBo'l, test tizimida “DS-ELISA-anti-HBeAg»
Anti-HBe musbat namunalarining OD ning tarqalish xususiyatlari o'rganildi

o'z ichiga olgan sarumlar ( n=78) va tarkibida HBsAg yo'q ( n=56).


Guruch. 2a. HBe- o'z ichiga olgan ijobiy sarum namunalariHBsAgtest tizimida “DS-ELISA-anti-HBe».

2b-rasm. OPga qarshi tarqatish xususiyatlariHBe- tarkibida bo'lmagan ijobiy sarum namunalari HBsAgtest tizimida "DS-ELISA-anti-HBe».
HBsAg ni o'z ichiga olmagan anti-HBe-musbat sarum namunalarining 87% optik zichligi 0,41 dan 0,81 gacha (2b-rasm). Bundan tashqari, HBsAg ni o'z ichiga olgan anti-HBe-musbat sarum namunalarining atigi 14 foizida bu diapazonda OD mavjud (2a-rasm). Ma'lumki, kech tiklanish bosqichida, HBsAg ga salbiy reaktivlik bilan, HBeAg ga antikor titrining asta-sekin pasayishi kuzatiladi (2b-rasm). Shuning uchun anti-HBe-musbat namunalarning ustun konsentratsiyasi 0,8 dan kam bo'lgan ODga to'g'ri kelishi mumkin.

Olingan ma'lumotlar ijobiy va ajratishning ishonchliligini ko'rsatadi

kasallikning bosqichidan qat'i nazar, salbiy qon zardobi namunalari. "DS-ELISA-HBeAg" va "DS-ELISA-antiHBe" test tizimlarining sezgirligi va o'ziga xosligi "Monolisa HBe" testi (BIORAD, Frantsiya) bilan solishtirganda o'rganildi (1-jadval).

1-jadval
Sezuvchanlik va o'ziga xoslikning qiyosiy tavsiflari

DS-ELISA-HBeAg va DS-ELISA-antiHB test tizimlari

Indeks	HBeAg ni aniqlash		AntiHBe ni aniqlash
	NPO "DS", DS-IFA-HBeAg	"BIO-RAD" "Monolisa HVe"	NPO "DS" DS-ELISA-antiHBe	"BIO-RAD"
Miqdori tadqiq qilingan namunalar	67	67	32	32
Ochilgan ijobiy namunalar	47	47	16	16
Ochilgan salbiy namunalar	20	20	16	16

1-jadvalda keltirilgan ma'lumotlar natijalar o'rtasidagi 100% muvofiqligini ko'rsatadi.

Ma'lumki, HBeAg va anti-HBe ning birgalikda ko'rsatilishi, ayniqsa ularning miqdoriy bahosi qo'shimcha prognostik ahamiyatga ega. Anti-HBe titrining tez o'sishi faol gumoral immun javobni tavsiflaydi va surunkalilik xavfini deyarli yo'q qiladi. Biz "o'tkir virusli gepatit B" klinik tashxisi bo'lgan bemorlarning qon zardobidagi namunalarida HBeAg/anti-HBe tarkibidagi o'zgarishlarni tahlil qildik (2-jadval).

jadval 2
HBV bilan kasallangan bemorlarda HBeAg/anti-HBe serokonversiyasi dinamikasi

Mavzu kasal	Qon olish kuni*	HBeAg	anti-HBe O.F./O.C.		Anti-HBc	qarshi HBc IgM
	1	1,4+	2,1+	+	+	+
	12	0,5-	1,0+	+	+	+
	21	0,3-	1,3+	+	+	+
	1	1,2+	1,2+	+	+	+
	5	0,4-	1,0+	+	+	+
	13	0,2-	2,5+	+	+	+
	1	1,2+	0,6-	+	+	+
	21	0,2-	4,6+	+	+	+
	30	0,2-	9,7+	+	+	+
	1	2,1+	0,5-	+	+	+
	8	0,6-	1,1+	+	+	+
	28	0,3-	2,8+	+	+	+
	1	0,7-	2,2+	+	+	+
	8	0,3-	2,2+	+	+	+
	15	0,3-	2,8+	+	+	+
	38	0,2-	3,0+	+	+	+
6	1	1,1+	4,4+	+	+	+
	14	0,5-	3,8+	+	+	+

* kasalxonaga yotqizilgan vaqtdan boshlab
Barcha sarum namunalari serologik belgilar mavjudligi uchun tekshirildi

OGV: HBsAg, anti-HBc, anti-HBc IgM. Kuzatish davri 13 dan 38 kungacha davom etdi. 1, 2 va 6-sonli bemorlarda HBeAg titrining pasayishi fonida anti-HBe aniqlandi. 3 va 4-sonli bemorlarda anti-HBe mos ravishda 21 va 8-kunlarda qon zardobidan HBeAg yo'qolganidan keyin paydo bo'ldi. Kasalxonaga yotqizilganida 5-sonli bemorning qon zardobida HBeAg aniqlanishini tahlil qilish salbiy natijani ko'rsatdi. Shu bilan birga, anti-HBega o'tish tekshiruvning birinchi kunidayoq qayd etilgan.

Barcha sub'ektlar HBeAg ga antikorlarning titrini oshirish tendentsiyasini ko'rsatdilar

qon zardobi, bu klinik ko'rinishning qulay dinamikasini bashorat qilish imkonini beradi

o'tkir respirator sindromning namoyon bo'lishi va tez tiklanish.

Yangi test tizimlarini o'rganish ularning yuqori diagnostik ishonchliligini ko'rsatdi. DS-ELISA-HBeAg va DS-ELISA-antiHBe ni solishtirish natijalari Monolisa HBe testi bilan 100% muvofiqligini ko'rsatdi.

Gepatit B bilan kasallangan bemorlarning sarum namunalarini dinamikada, testlarda o'rganishda

yuqori sezuvchanlik va o'ziga xoslikni tasdiqladi.

Sinov namunalari va konjugatning qisqa inkubatsiya vaqti (1 soat) eng qisqa vaqt ichida terapevtik tadbirlarni o'tkazishning to'g'ri taktikasini aniqlash imkonini beradi. Yaratilgan test tizimlaridan foydalanish oson va tejamkor (HBeAg ni aniqlash uchun 50 mkl zardob va anti-HBe aniqlash uchun 10 mkl sarum talab qilinadi). Sinovlarning yuqori sifat ko'rsatkichlari ularni infektsion jarayonning borishini bashorat qilish va gepatit B uchun terapiyani kuzatishda muvaffaqiyatli qo'llash imkonini beradi.
ADABIYOT

1.Mayer K.P. Gepatit va gepatitning oqibatlari / K.P. Mayer. – M., GEOTAR, Tibbiyot, 1999.- B.720

2.Onishchenko G.G. Virusli gepatitning tarqalishi milliy xavfsizlikka tahdid sifatida / G.G. Onishchenko, L.A. Dementieva // Mikrobiologiya jurnali. –2003.-4-son.- B.93-99.

3.Sorinson S.N. Virusli gepatit / S.N. Sorinson. - Sankt-Peterburg, Teza, 1997.- 306 P.

4. Baumeister M. Gepatit B virusi va antigenga xos epitoplar va tijorat anti-HVe immunoassaylarining cheklovlari / M. Baumeister // Tibbiy virusologiya jurnali.- 2000.-N 60.- R. 256-263.

5.Keyn M. Gepatit B infektsiyasini nazorat qilish bo'yicha global dastur / M. Kane // Vaktsina. – 1995.-N131(1-ilova).- R.47-6. Shunichi SatO. Fulminant gepatit bilan og'rigan bemorlarda asosiy promouterda mutatsiyalar bilan gepatit B virusi shtammlari / Shunichi Sato, Kazuyuki Suzuki // Ichki tibbiyot yilnomalari. – 1995.- N122.- R.241-248.

7. Ou J.-N. Gepatit B virusi va antijenining molekulyar biologiyasi./ J.-N.Ou // Gastroenterologiya va gepatologiya jurnali. – 1997.- 12-son (1-ilova) – R. 178-187.

8.Tiollais P. Gepatit B virusi. / P. Tiollais, C. Poursel, A. Dejan // Tabiat. – 1985. – B.317, 489-495
Nashr qilingan: J. “Klinik laboratoriya diagnostikasi” - 2005.-No6-B.-34-37.

OIV bizning avlodimizning ofatidir. OIVga tashxis qo'yish uchun qanday usullar mavjud, OIV uchun Elishay testi haqida chuqur ma'lumot. Uni qanday qabul qilish kerak, tahlil natijalarini qanday izohlash kerak.

Inson immunitet tanqisligi virusi bizning avlodimiz uchun eng dahshatli infektsiyalardan biridir.

OIV bizning immunitet tizimimizga halokatli ta'sir ko'rsatadi, va agar kasallikning rivojlanishi o'z vaqtida to'xtatilmasa, u orttirilgan immunitet tanqisligi sindromiga aylanishi mumkin. OIV erkak va ayol jinsiy a'zolari orqali jinsiy aloqa paytida sheriklar o'rtasida to'g'ridan-to'g'ri aloqa orqali tarqaladi. Infektsiyaning yana bir sababi qon oqimiga kiradigan virus bo'lishi mumkin. Bu steril bo'lmagan asboblardan foydalanish, ifloslangan qonni quyish va hatto avlodlar bo'ylab: emizish paytida infektsiyalangan onadan bolaga o'tishi tufayli yuzaga keladi.

Hozirga qadar butun dunyo olimlari OITSni davolay oladigan yangi avlod tibbiyotini yaratish uchun o'z miyalarini sindirishmoqda, ammo ilm-fan taraqqiyotining tez sur'atlariga qaramay, inson immunitet tanqisligi virusi sayyoramiz bo'ylab tarqalishda davom etmoqda.

ELISA - OIVni tashxislash usuli

20-asr avlodi olimlari OIVni tashxislashning bir qancha usullarini ishlab chiqdilar, ulardan eng muhimi hisoblanadi. bog'langan immunosorbent tahlili. OIV Elishay nisbatan yaqinda - 90-yillarning boshlarida amalga oshirila boshlandi. Vaqt o'tishi bilan usul takomillashtirildi va yangi tafsilotlarga ega bo'ldi. Endi Elishay usulining ishonchliligi eng yuqori ko'rsatkichlardan biridir - taxminan 98%. Shunga ko'ra, bu usul ko'proq va tez-tez qo'llaniladi.

Elishay - bemor OIVga test o'tkazishda duch keladigan birinchi test. Elishay usuli qonda antikorlar mavjudligini aniqlaydi. Agar test qonda antikorlar mavjudligini aniqlasa, u holda virus mavjud. Biroq, ushbu test bo'yicha ma'lumot immunoblotting (IB) va so'nggi avlod usuli - polimeraza zanjiri reaktsiyasi (PCR) kabi boshqa testlar bilan qo'llab-quvvatlanishi kerak.

Antikorlar - bu organizmga kiradigan infektsiyaga reaktsiya sifatida plazma hujayralari tomonidan ishlab chiqariladigan maxsus protein birikmalari (antikorlar infektsiyadan 1-2 oy o'tgach shakllana boshlaydi).

OIV infektsiyasining sabablari

Agar siz OIV bilan kasallangan odam bilan aloqada bo'lgan bo'lsangiz yoki infektsiya xavfi mavjud bo'lsa, shifokoringiz sizga tekshiruv uchun yo'llanma yozadi. OIV bilan kasallanish xavfi ostida bo'lgan avlodlar quyidagilardan iborat:

• bir oy davomida in'ektsiya davolash kursidan o'tish;
• maxsus himoya vositalarisiz jinsiy aloqada bo'lish;
• jinsiy aloqa paytida yuqadigan infektsiyalarning tashuvchilari;
• saksoninchi yillarda qon ivishining sababini aniqlash uchun qon quyish yoki in'ektsiyadan so'ng bemorlar.

Agar sizda OIV maqomiga shubhangiz bo‘lsa va infektsiyani yuqtirish ehtimolidan xavotirda bo‘lsangiz, OIV infeksiyasini keng qamrovli tekshiruvdan o‘tkazish uchun zudlik bilan mamlakatimizdagi istalgan tibbiyot muassasasidan yordam so‘rash tavsiya etiladi. Sinov natijalari bir oy ichida olinadi. OIV infektsiyasi xavfi ostida bo'lgan odamlarni har 4 oyda bir marta tekshirish tavsiya etiladi.

Qanday qilib sinovdan o'tish kerak

OIV uchun qon testini o'tkazish uchun maxsus tayyorgarlik talab qilinmaydi, ammo bu yaxshiroqdir eng oddiy qoidalarga amal qiling:

• Kechqurun ovqatlanmaslik yaxshiroqdir, lekin ertalab bo'sh qoringa testdan o'tish kerak;
• Jismoniy mehnat bilan tanani ortiqcha yuklash tavsiya etilmaydi;
• sog'lom ovqat iste'mol qiling, bir muddat sigaret va spirtli ichimliklardan voz keching;
• Noto'g'ri test natijalarini istisno qilish uchun siz jiddiy kasalliklarni davolashdan keyin testdan o'tmasligingiz kerak.

Inson immunitet tanqisligi virusi infektsiyasi jiddiy tashxis hisoblanadi. Tashxisdagi xatolar halokatli oqibatlarga olib kelishi mumkin. OIV uchun Elishay testi eng qulay tadqiqot usuli hisoblanadi, ammo u barcha holatlarda ma'lumotli emas.

Elishay - ferment bilan bog'liq immunosorbent tahlili. Elishay usulining maqsadi biologik materialda immunitet tanqisligi virusiga antikorlarni aniqlashdir. Usul yordamida siz suyuqlikda viruslarning o'zlari emas, balki faqat ularning mavjudligiga javoban ishlab chiqarilgan antikorlarning mavjudligini kuzatishingiz mumkin. Enzim immunoassay STD diagnostikasida keng qo'llaniladi. Bu jinsiy yo'l bilan yuqadigan kasalliklarni aniqlashga yordam beradi.

Elishayning bir necha turlari mavjud: to'g'ridan-to'g'ri versiya, bilvosita versiya, sendvich usuli. Qanday bo'lmasin, texnika antikorlarning mavjudligini aniqlashga asoslangan bo'lib, ular xorijiy agentning kirib borishining ko'rsatkichi bo'lib xizmat qiladi. Ushbu "teglar" ni aniqlash uchun biologik komponent fermentlar bilan ishlanadi.

Enzim immunoassay antikorlarni 96-98% aniqlik bilan aniqlaydi, xatolik ahamiyatsiz. Bu 2-4% ni tashkil qiladi.

ELISA - OIVni tashxislash usuli

OIV uchun ELISA testi tashxisning birinchi bosqichidir. Immunitet tanqisligi virusining antijeni p24, p15, p17, p31 oqsillari va gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160 glikoproteinlaridir.

Virusli oqsilni aniqlash uchun venadan qon namunasi olinadi. Elishay qon tekshiruvi uchun yuborilgan namuna ferment immunoassay reagentlari bilan ishlanadi. Sarum qondan ajratilgan. Agar tadqiqot davomida ular topilsa, bu virus allaqachon qonda mavjudligini anglatadi.

Qon qat'iy ravishda och qoringa topshiriladi. Sinovdan 2 kun oldin yog'li ovqatlar iste'mol qilish yoki spirtli ichimliklarni iste'mol qilish tavsiya etilmaydi. 14 kun davomida antiviral preparatlarni qabul qilishni to'xtatishingiz kerak.

Usulning afzalliklari:

• nisbatan past narx;
• reaktivlarning yuqori barqarorligi;
• yuqori sezuvchanlik;
• qisqa muddatli;
• inson omilining minimal ta'siri.

Zamonaviy ELISA test tizimlari xalqaro standartlarga muvofiq ishlab chiqariladi. Bu usulning aniqligini oshiradi.

Ferment immunoassay har doim ham ishonchli natijalarni bermaydi. Virus qonga kirgandan so'ng, rivojlanishning yashirin (yashirin) bosqichi boshlanadi. Viruslar ko'paya boshlagan va antikorlar hali shakllanmagan davr "seronegativ oyna vaqti" deb ataladi. Ushbu bosqichda ELISA qilishning ma'nosi yo'q. Agar infektsiya sodir bo'lsa, natija bo'ladi. Virusning qanchalik tez namoyon bo'lishi tanaga qancha xavfli hujayralar kirganiga bog'liq. Himoyalanmagan jinsiy aloqada yoki ifloslangan qonni quyishda bu muddat minimal bo'ladi.

OIV Elishayning yuqori ishonchliligi uchun test uch marta o'tkaziladi. Odamning immunitet tanqisligi virusi uchun Elishay testini topshirish muddati:

• Ehtimoliy aloqadan 6 hafta o'tgach,
• 3 oy ichida,
• olti oydan keyin.

OIV uchun 4-avlod Elishay - bu infektsiyaning dastlabki bosqichlarida eng ma'lumot beruvchi usul. U shubhali infektsiyadan 1 oy o'tgach amalga oshirilishi mumkin. Sinov 3-avlod analogiga nisbatan qimmat. Shuning uchun davlat tibbiyot muassasalarida qo'shimcha diagnostika usuli sifatida qo'llaniladi. 3-test bepul o'tkaziladi.Agar uning natijalariga ko'ra aniq javob bera olmasa, bemor 4-avlod ELISA ga yuboriladi.

Muhim! Infektsiyadan so'ng darhol odam yuqumli bo'ladi. U o'z tashxisi haqida hali bilmagan bo'lsa ham, boshqalar uchun xavfli!

Agar Elishay OIV antijenlariga antikorlarni aniqlasa, qo'shimcha tadqiqotlar o'tkazilishi kerak. Bu o'z ichiga oladi. Ushbu usulning ishonchliligi 80% ni tashkil qiladi. PCR testi qon, sperma va vaginal oqindi. Biologik suyuqlik tibbiy reaktorda parchalanadi va keyin fermentlar bilan ishlov beriladi. Natijada suyuq muhitda OIV hujayralarining kontsentratsiyasi haqida ma'lumotlar olinadi. Katta xato (20%) tufayli, agar natija ijobiy bo'lsa, immunoblotting qo'shimcha ravishda amalga oshiriladi.

Tashxisning keyingi bosqichi Combo testi (yoki immunoblotting). Bu juda sezgir test (98% ishonch), agar Elishay natijalari 6 oydan keyin noaniq bo'lsa, o'tkaziladi.

Elishay natijalarini dekodlash

Shifrni ochish vaqti 24 dan 48 soatgacha. Agar shoshilinch ma'lumot olish zarur bo'lsa (jarrohlik talab qilinadi), dekodlash 2 soat ichida amalga oshiriladi. Viloyat tibbiyot markazlarida har doim ham zarur reaktivlar mavjud emas. Namuna ariza berilgan joyda olinadi, keyin viloyat markaziga o'tkaziladi. Bunday sharoitda natijani 1-2 hafta ichida bilib olish mumkin.

Ferment immunoassay natijasi ijobiy yoki salbiy bo'lishi mumkin; boshqa variantlar yo'q.

Dastlabki va takroriy ELISA natijasi ijobiy bo'lsa ham, bemorni OIV bilan kasallangan deb tan olish mumkin emas. Xatoga bog'liq. Noto'g'ri ijobiy natijaning sabablari:

• surunkali kasalliklar;
• uzoq muddatli yuqumli kasalliklar;
• homiladorlik.

Shuning uchun tahlil natijasi qo'shimcha tadqiqotlar bilan aniqlanishi kerak.

Agar immunoblotting OIV-musbat (reaktiv) bo'lsa, odam OIV bilan kasallangan deb hisoblanadi, ya'ni u sog'lom.

Vaqt o'tishi bilan virus hujayralari belgilangan dorilarga moslashadi. Nazorat qilish uchun Elishay testi vaqti-vaqti bilan takrorlanadi.

Ba'zida immunoblotting noto'g'ri salbiy natijani ko'rsatadi. 6 oy (yoki undan ko'p) davomida immunitet tanqisligi virusi juda kam uchraydi. Agar oz miqdordagi virus hujayralari qonga kirsa, bu mumkin. Umumiy holatlarning 0,5 foizida infektsiyani faqat bir yildan keyin aniqlash mumkin. 99,5% da, infektsiyadan keyin olti oy ichida Elishay ishonchli natija beradi.

Hatto yuqori aniqlikdagi tadqiqotlar bilan ham xato qilish ehtimoli 2% ni tashkil qiladi. Inson omilini unutmasligimiz kerak. Xatolik ehtimolini bartaraf qilish uchun test 2 xil muassasada o'tkazilishi mumkin.