ELISA tesztrendszerek „ds-ifa-hbeAg” és „ds-ifa-anti-hbe”. LLC által gyártott tesztrendszerek "npo" diagnosztikai rendszerek A lemez mosására vonatkozó követelmények

1 Állítsa be a hozzárendelést

1.1 A készletet az első és második típusú humán immunhiány vírus (HIV-1 és HIV-2) és a HIV-1 p24 antigén elleni antitestek egyidejű kimutatására tervezték humán szérumban és plazmában „in vitro” indirekt enzimekkel. kapcsolt immunszorbens vizsgálat.

2 A készlet jellemzői és működési elve

2.1 Állítsa be az összetételt:

Alkatrész neve	Mennyiség
Immunszorbens	2 tabletta
Pozitív kontrollminta AT (K + AT)	1 fiola, 3 ml
Pozitív kontroll minta AG (K + AG)	3 fiola, liofilizált készítmény
Negatív kontrollminta (NAK NEK -)	2 üveg 3 ml-es
1. konjugált oldat (RK-1)	1 fiola, 12 ml
2. konjugátum (Kg-2)	1 fiola, 1 ml
2. sz. konjugált hígító oldat (RR-K2)	2 üveg 18 ml-es
Szubsztrát puffer ( BRS)	2 üveg 18 ml-es
Kromogén TMB	1 fiola, 1 ml
Tween foszfát puffer koncentrátum (FSB-T×25)	2 üveg 50 ml-es
Állítsa le a reagenst	1 fiola, 12 ml
Reagens fürdőkészlet hegyekkel többcsatornás pipettákhoz	1 készlet
Ragasztófólia

2.2 Az "ELISA-HIV 1.2 AGAT" kit fő összetevői az immunszorbens, az 1. számú konjugátum oldat és a 2. számú konjugátum.

Immunszorbens egy polisztirol tabletta, amelynek üregeiben rekombináns HIV-1 (gp41) és HIV-2 (gp36) antigének keveréke, valamint HIV-1 p24 antigén elleni monoklonális antitestek adszorbeálódnak.

1. konjugált oldat HIV-1 p24 antigén elleni biotinnal jelölt monoklonális humán antitestek és biotinnal jelölt rekombináns HIV-1 és HIV-2 fehérjék keveréke.

2. konjugátum torma-peroxidázzal konjugált sztreptavidin.

Pozitív kontrollminta AT- HIV-1 és HIV-2 elleni antitesteket tartalmazó humán vérszérum, amely nem tartalmaz hepatitis C vírus és Treponema pallidum ellenanyagot, HIV-1 p24 antigén és HBs antigén, 3 órán át 56 ºC-on történő melegítéssel inaktiválva.

Pozitív kontroll minta AG– natív p24 HIV-1 antigént tartalmazó humán vérszérum, amely nem tartalmaz HIV-1, HIV-2, hepatitis C vírus és Treponema pallidum és HBs antigén elleni antitesteket, 3 órán át 56 ºC-on történő hevítéssel inaktiválva.

Negatív kontrollminta– HIV-1, HIV-2, HCV, HIV-1 p24 antigén és HBs antigén elleni antitesteket nem tartalmazó humán vérszérum, amelyet 3 órás, 56 ºC-os melegítéssel inaktiválnak.

A készlet működési elve. Ha az 1. számú konjugátum oldatát és a fertőzött vér szérummintáit bevisszük a tabletta üregeibe, a p24 antigén mind a szilárd fázison lévő specifikus antitestekhez, mind pedig a konjugátumoldat részét képező monoklonális biotinilált anti-p24 antitestekhez kötődik. 1. sz.; A HIV-specifikus antitestek mind a szilárd fázison adszorbeált rekombináns HIV-1 és HIV-2 antigénekhez, mind az 1. számú konjugált oldatban lévő antigénekhez kötődnek, antigén-antitest komplexeket képezve. Az anti-p24 specifikus antitestek és a p24 antigén immunkomplexeit a 2. számú konjugátum detektálja. A meg nem kötött komponensek lemosása után peroxidáz szubsztrát (hidrogén-peroxid) és TMB kromogén oldatát adjuk a lemez üregeihez.

A peroxidáz reakciót leállító reagens (0,9 M kénsavoldat) hozzáadásával állítjuk le, és a lyukakban lévő oldat színintenzitását spektrofotométeren optikai sűrűség (OD) értékként mérjük 450 nm hullámhosszon.

Az OD-érték egyenesen arányos a szérum- vagy plazmamintában lévő specifikus antitestek és/vagy p24-antigén koncentrációjával. Minél magasabb az antitestek és/vagy p24 antigén tartalma a szérummintában, annál nagyobb a festődés intenzitása.

2.3 A készletet úgy tervezték, hogy tartsa 24 produkció ELISA: 1 beállítás - 1 csík (8 lyuk). Teljes - 192 definíciók beleértve a kontroll mintákat is.

3 Óvintézkedések a készlet használatakor

3.1 A készlet összes összetevője a használt koncentrációkban nem mérgező. Mindazonáltal dolgozzon minden olyan vizsgált emberi szérum (plazma) mintával, amely potenciálisan fertőzöttnek tekinthető, képes tárolni és továbbítani a HIV, hepatitis B vírust vagy a vírusfertőzés bármely más kórokozóját, elhasznált oldatokkal és folyadékokkal, valamint különféle berendezésekkel, amelyek az elemzési folyamat során szennyezett bizonyos biztonsági intézkedéseket igényel a készlet használatakor:

A munkát speciálisan felszerelt helyiségben kell elvégezni;

Személyi védőfelszerelés használatával és az óvintézkedések betartásával kell dolgozni a , , és előírásainak megfelelően.

3.2 A kénsavat tartalmazó leállító reagens irritáló hatású. Bőrrel és nyálkahártyákkal való érintkezés esetén azonnal öblítse le bő vízzel.

3.3 A készlettel végzett munka során a munkahelyeket befúvó és elszívó szellőzéssel kell ellátni.

3.4 Minden, a laboratóriumban készlettel dolgozó személynek kötelező orvosi vizsgálaton kell átesnie a követelményeknek megfelelően.

3.5 Az orvosi hulladékot és/vagy a fel nem használt, lejárt készleteket megfelelően kell ártalmatlanítani.

4 A készlettel végzett munka szabályai

4.1 A hamis eredmények kizárása érdekében a vizsgálati mintákat olyan körülmények között kell elkészíteni és tárolni, amelyek megakadályozzák a baktériumok növekedését. Az aggregált szérumkomponenseket vagy üledéket tartalmazó szérummintákat (5-10) perces centrifugálással kell tisztítani 3000 fordulat/perc mellett. A szérumminták (2-8) °C-on legfeljebb 5 napig tárolhatók. A fagyasztott minták (lehetőleg legalább mínusz 20 °C hőmérsékleten) legfeljebb 1 évig tárolhatók. Kerülni kell a minták ismételt fagyasztási-olvadási ciklusait.

Emlékeztetni kell arra, hogy a hemolízisben, hiperlipidémiában, baktériumszaporodásban szenvedő minták, valamint a hosszú ideig fagyasztás nélkül tárolt minták nem alkalmasak elemzésre.

Az eredmények megbízhatósága a következő szabályoktól függ:

A készlet lejárati dátuma után nem használható, valamint a különböző sorozatokból származó készletek összetevőinek keverése nem megengedett;

Minden reagens elkészítéséhez külön tartályt kell használni;

Ne kezelje a reagensek elkészítéséhez használt összes edényt fertőtlenítő- és tisztítószerekkel. Ha szükséges, öblítse le ivóvízzel, majd ötször öblítse le desztillált vízzel;

A TMB és RX kromogénnel való munkavégzéshez külön tartályt kell használni az oldatokhoz, pipettahegyekhez és edényekhez.

Ügyelni kell a reagensek alapos összekeverésére;

A lemez üregeinek oldatokkal és reagensekkel való feltöltése és kiürítése közötti időnek legalább 30 másodpercnek kell lennie. Az ELISA-beállítás minden szakaszában nem megengedett a lyukak szárítása;

Az alátét használatakor ügyeljen a tányér és a csatlakozótömlők mosásához szükséges oldatot tartalmazó tartály állapotára: nem mutatkozhatnak baktérium- vagy gombásodás jelei;

Cserélhető hegyű automata pipetták használata szükséges, amelyek az átlagos dózis értékére és a pipettázási eredmények konvergenciájára igazolnak (hiba legfeljebb 3%);

Az adagolókat és a munkafelületeket 70%-os etil-alkohol térfogatú oldattal kell kezelni. Ne használjon klóramint és más klórtartalmú anyagokat;

A teszt- és kontrollminták kezeléséhez eldobható pipettahegyek használata javasolt. Minden szérummintát, valamint a kit reagenseit külön heggyel kell gyűjteni.

A PK-1 üregeibe való bejuttatáskor ne érintse meg a tabletta felületét és az üregekben lévő oldatot a pipetta hegyével.

Az elemzés során kerülje a közvetlen napsugárzást a munkafelületen.

4.2 A liofilizált komponensek felnyitásakor és feloldásakor ügyelni kell arra, hogy az injekciós üvegek fedelén és falán ne maradjon szárazanyag.

5 Az elemzéshez szükséges berendezések és anyagok

5.1 Függőleges pásztázó spektrofotométer, amely lehetővé teszi az oldatok optikai sűrűségének mérését a tabletta üregeiben 450 nm hullámhosszon;

Fél- vagy automata készülék tabletták mosására (mosó);

TC-80 M2 típusú szárazlevegő-termosztát, amely (37 ± 1) °C hőmérsékletet tart fenn, vagy hasonló jellemzőkkel rendelkezik;

Egycsatornás automata pipetták cserélhető hegyekkel, amelyek lehetővé teszik 0,01 és 5,0 ml közötti folyadékmennyiségek felvételét;

8 csatornás automata pipetták cserélhető hegyekkel, lehetővé téve a folyadékmennyiség kiválasztását 0,5 ml-ig;

2000 ml űrtartalmú mérőhenger;

2000 ml űrtartalmú laboratóriumi lombik;

20 ml űrtartalmú üvegpalackok;

Tálcák reagensekhez vagy Petri-csészékhez (átmérő 100 mm);

Gyógyászati ​​higroszkópos vatta;

Szűrőpapír;

Sebészeti gumikesztyűk;

70%-os etil-alkohol térfogatú oldata;

6%-os hidrogén-peroxid tömeghányadú oldat;

Ionmentesített vagy desztillált víz;

Konténer szilárd hulladék összegyűjtésére;

Konténer folyékony hulladék leeresztésére.

6 Felkészülés az elemzésre

6.1 Az elemzés előtt vegye ki a reagenskészletet a hűtőszekrényből, nyissa fel a doboz fedelét, és tartsa a készlet alkatrészeit megfelelő hőmérsékleten. (18-25) °C 30 percig.

A vizsgálat előtt alaposan keverje össze az összes szérum (plazma) mintát és reagenst.

A tesztkészlet reagensfogyasztását, amelyet a felhasznált csíkok száma határoz meg, az A. függelék A.1. táblázata tartalmazza.

6.2 A lemezmosó oldat elkészítése

Figyelem! Az elemzés megkezdése előtt 15 perccel készítse elő a lemez mosásához szükséges oldatot!

Ha az FSB-T × 25 injekciós üveg csapadékot tartalmaz, használat előtt fel kell melegíteni (37 ± 1) °C hőmérsékleten, amíg a csapadék teljesen fel nem oldódik. Adja hozzá az FSB-T × 25-ös fiola tartalmát egy 2000 ml-es mérőhengerbe, majd adjon hozzá desztillált vizet a jelig. 1250 mlés óvatosan keverje össze az oldatot. Az oldat (2-8) °C-on 72 órán át tárolható.

Egy vagy több csík használata esetén az injekciós üveg tartalmát FSB-T × 25-tel erőteljesen (20-30) másodpercig rázza fel, majd a szükséges mennyiségű oldatot (A.1. táblázat) öntse egy mérőpohárba vagy hengerbe. , adjunk hozzá szükséges mennyiségű desztillált vizet és keverjük össze az oldatot . A fel nem használt FSB-T×25 zárt injekciós üvegben (2-8) °C hőmérsékleten tárolható a készlet lejárati ideje alatt.

6.3 Immunszorbens készítmény

Az immunszorbens használatra kész.

Nyissa ki a csomagot, és szerelje fel a szükséges számú csíkot a keretre. A megmaradt csíkokat nedvszívóval ellátott, szorosan lezárt tasakban (2-8) °C-on tárolja 3 hónapig.

6.4 K + AT, K - , RK-1, PP-K2, BRS és leállító reagens előkészítése

A K + AT, K - , RK-1, RR-K2, BRS és a stop reagens használatra kész.

Figyelem! A csapadék RK-1-gyel ellátott fiolában lehetséges. A felülúszót az elemzéshez kell használni.

A fel nem használt RK-1, PP-K2, BRS és leállító reagens az injekciós üvegek felbontása után a készlet lejárati ideje alatt zárt fiolákban (2-8) °C hőmérsékleten tárolható.

A többi K + AT és K - felbontás után a palack zárt palackokban (2-8) ° C hőmérsékleten tárolható a készlet lejárati ideje alatt.

6.5 K + AG oldat készítése

Figyelem! A K + AG oldatot az elemzés megkezdése előtt 15 perccel kell elkészíteni!

A liofilizált K + AG visszaállításához az injekciós üveg kinyitása előtt enyhén ütögetve rázza le az injekciós üveg vagy a dugó falára tapadt részecskéket. Nyissa ki az injekciós üveget, és helyezze a parafát fejjel lefelé egy száraz felületre. Adjon hozzá 0,8 ml desztillált vizet az injekciós üveghez. Zárja le az injekciós üveget dugóval, tartsa 10 percig (18-25) ° C hőmérsékleten, és óvatosan döntse meg és forgassa az injekciós üveget, keverje össze a tartalmát, amíg teljesen fel nem oldódik, elkerülve a habképződést.

A feloldott K + AG zárt injekciós üvegben (2-8) °C hőmérsékleten egy hónapig, mínusz 20 °C hőmérsékleten - hat hónapig tárolható. A helyreállított K + AG egyszeri fagyasztása-felengedése megengedett.

6.6 Kg-2 oldat készítése munkahígításban

Vegye ki az A.1 táblázatban jelzett térfogatot a Kg-2-t tartalmazó injekciós üvegből, és vigye át a PP-K2-t tartalmazó injekciós üvegbe. Keverje össze alaposan az injekciós üveg tartalmát, elkerülve a habképződést.

Ha egy vagy több csíkot használ, vegye be a szükséges mennyiségű PP-K2-t egy tiszta injekciós üvegbe, adjon hozzá Kg-2-t az A.1. táblázat szerint, és keverje össze az oldatot habzás nélkül.

Figyelem! A munkahígítású Kg-2 oldatot közvetlenül felhasználás előtt kell elkészíteni! A munkahígítású Kg-2 oldat 15 percig (18-25) °C hőmérsékleten tárolható. Csak új reagens tálcát és új hegyeket használjon!

A maradék Kg-2 a készlet lejárati ideje alatt zárt injekciós üvegben (2-8) °C hőmérsékleten tárolható.

6.7 Munkafelület-oldat elkészítése

A TMB kromogént tartalmazó palackot használat előtt (37±1) hőmérsékletre kell melegíteni.° C-on a kristályok teljes feloldódásáig.

Vegye ki az A.1 táblázatban jelzett térfogatot a TMB kromogént tartalmazó injekciós üvegből, és vigye át a BRS-t tartalmazó injekciós üvegbe. Keverje össze alaposan az injekciós üveg tartalmát, elkerülve a habképződést.

Ha egy vagy több csíkot használ, vigye be a szükséges mennyiségű BRS-t egy tiszta injekciós üvegbe, adjon hozzá TMB kromogént az A.1. táblázat szerint, és keverje össze az oldatot habzás nélkül.

Figyelem! Az aljzat munkaoldatát közvetlenül felhasználás előtt, fénytől védett helyen készítsük el! Az oldat 20 percig (18-25) °C hőmérsékleten, fénytől védve tárolható.

Az oldatot fénytől és fémekkel vagy fémionokkal való érintkezéstől védeni kell. Az aljzat oldatának felhasználás előtt színtelennek kell lennie. Azokat az edényeket, amelyek a reakció során érintkezésbe kerülnek a hordozóoldattal, szintetikus tisztítószerek használata nélkül kell elmosni. Csak új reagens tálcát és új hegyeket használjon!

A maradék TMB kromogén a készlet lejárati ideje alatt zárt injekciós üvegben (2-8) °C hőmérsékleten tárolható.

7 Lemezmosási követelmények

A mosás minden szakaszában ellenőrizni kell az összes lyuk feltöltését és a folyadék teljes eltávolítását (leszívását) belőlük;

Minden mosáskor az összes lyukat színültig meg kell tölteni oldattal (üregenként 0,30-0,35 ml), anélkül, hogy a szomszédos kutakból túlcsordulna vagy túlcsordulna a folyadék;

Tartsa a lyukakat a lemezmosó oldattal megtöltve 30 másodpercig;

Minden egyes leszívásnál óvatosan távolítsuk el a visszamaradt folyadékot a lyukakból úgy, hogy a keretet fordított helyzetben a csíkokkal a többszörösen összehajtott, polietilén lapra helyezett szűrőpapírra ütögetjük;

A lemez nem megfelelő mosása hibás eredményhez vezet.

8 Elemzés készítése

8.1 A tabletta bármely két üregébe adjunk hozzá 0,07 ml(70 µl) K + AT, a másik két kútban - által 0,07 ml(70 µl) K + AG, három másik lyukban - a 0,07 ml(70 µl) NAK NEK - .

Figyelem! Ha az ELISA-t egy csíkra állítja be, akkor megengedett két lyuk használata K - - egy lyuk, K + AT - egy lyuk, K + AG - egy lyuk.

A tabletta többi üregébe adjuk hozzá 0,07 ml(70 µl) a vizsgált humán szérum (plazma) mintákból.

Figyelem! Minden mintát eldobható heggyel kell venni!

8.2 A tabletta minden üregébe a kontroll minták és a vérszérum (plazma) tesztmintái fölé azonnaláltal hozzájárul 0,05 ml(50 µl) RK-1. Keverje össze a lyukak tartalmát úgy, hogy finoman megütögeti a tányér széleit.

8.3 (37 ± 1) ° Belülről 60 perc.

Figyelem! Az inkubáció vége előtt (1-2) perccel készítsen Kr-2 oldatot munkahígításban (6.6. szakasz).

8.4 Távolítsa el az üregek tartalmát az alátéttel, majd mossa le a lemez üregeit a lemezmosó oldattal (6.2. lépés). hétszer.

8.5 Adja hozzá a lemez összes mélyedéséhez 0,15 ml(150 µl) oldatot Kg-2 munkatenyésztésben (6.6. pont).

8.6 Zárja le a lemezt fóliával vagy fedje le fedővel, és inkubálja termosztátban hőmérsékleten (37 ± 1) ° Belülről 10 perc.

8.7 Távolítsa el a lemez üregeinek tartalmát egy alátéttel, majd mossa le a lemezek üregeit a lemez mosására szolgáló oldattal (6.2. szakasz) hétszer.

8.8 Helyezze be a tabletta minden üregébe 0,15 ml(150 µl) hordozó munkaoldat(6.7. pont).

Az aljzat munkaoldatának elkészítésekor (6.7. pont) f A TMB kromogént tartalmazó lakont használat előtt (3-5) percig (37 °C hőmérsékleten) kell melegíteni.± 1) °C-on, amíg a kristályok teljesen fel nem oldódnak.

8.9 Zárja le a lemezt fóliával vagy fedje le fedővel, és inkubálja termosztátban hőmérsékleten (37 ± 1) ° VAL VEL sötét helyen azért 15 perc.

Figyelem! Az inkubáció végén a HIV-1 és/vagy HIV-2 és/vagy HIV-1 p24 antigén elleni antitesteket tartalmazó szérummintákban az oldat színe színtelenről kékre változik, a koncentrációtól függően változó intenzitású. antitestek és/vagy antigén mennyisége a vizsgált szérummintában.

8.10 Állítsa le a peroxidáz reakciót úgy, hogy hozzáadja az összes mérőhelyhez 0,05 ml(50 µl) stop reagens.

Figyelem! Az anti-HIV-1 és/vagy HIV-2 antitesteket és/vagy HIV-1 p24 antigént tartalmazó szérummintákat tartalmazó lyukak az oldat színét kékről sárgára változtatják, változó intenzitással.

8.11 Legkésőbb (1-2) perccel a reakció leállítása után határozzuk meg az OD-t a lyukakban egyhullámú üzemmódban egy hullámhosszon 450 nm.

9 Az elemzési eredmények feldolgozása

9.2 Az eredményeket csak akkor vesszük figyelembe, ha:

Az OPsr K értéke - nem haladja meg a 0,2 OE-t;

Az OP K egyes egyedi értékei nem térhetnek el a K OP-któl 30%-nál nagyobb mértékben. Ha az OP K - három értéke közül valamelyik túllépi ezt a határt, azt ki kell zárni az OP K - számításából. Ha a három ODK-érték közül kettő kívül esik ezen a határon, a vizsgálatot meg kell ismételni egy új reagenskészleten;

Az OPsr K + AT értéke több mint 1,0 OE;

Az OPsr K + AG értéke több mint 1,0 OE.

9.3 Ha a fenti feltételek teljesülnek, számítsa ki a kritikus értéket (OPcrit.), OE, az (1) képlet szerint:

OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).

10 Analitikai és diagnosztikai jellemzők

Érzékenység reagenskészlet ELISA-HIV 1.2 AGAT HIV-1 p24 antigén kimutatására –

Specificitás reagenskészlet ELISA-HIV 1.2 AGAT– 100% Standard AT(-)HIV. Szabványos szérumpanel, amely nem tartalmaz antitesteket az első és második típusú humán immundeficiencia vírus (HIV-1,2) és HIV-1 antigén (p24) ellen. CJSC MBS.

11 Kit kiadási űrlap

11.1 A készlet öt konfigurációban kapható:

1 készlet 1P - kézi elemzés. A készlet 12 ELISA-futtatásra készült egy összecsukható lemezen: 1 menet - 1 csík (8 lyuk). Összesen - 96 meghatározás, beleértve a kontrollmintákat is;

2 készlet 2M - kézi elemzés. A készlet 2 ELISA futtatásra készült monolit lemezeken: 1 futtatás - 1 lemez. Összesen - 192 meghatározás, beleértve a kontrollmintákat is;

3 készlet 2R- kézi elemzés. A készlet tartásra készült 24 produkció ELISA 2-hez összecsukható x tabletta: 1 beállítás - 1 csík (8 lyuk). Teljes - 192 definíció, beleértve a kontrollmintákat is;

4 készlet A2M - elemzés automatikus analizátoron. A készlet 2 ELISA futtatásra készült monolit lemezeken: 1 futtatás - 1 lemez. Összesen - 192 meghatározás, beleértve a kontrollmintákat is;

5 készlet A2P - elemzés automatikus analizátoron. A készlet 24 ELISA-futtatásra készült, 2 összecsukható lemezen: 1 menet – 1 csík (8 lyuk). Összesen 192 meghatározás, beleértve a kontroll mintákat is.

12 A készlet tárolási és használati feltételei

12.1 A készletet tiszta, nedvességtől védett és világos helyiségben (2-8) °C hőmérsékleten kell tárolni a teljes eltarthatóság alatt. Ne fagyassza le a készlet alkatrészeit.

12.2 A megbízható eredmények eléréséhez szigorúan be kell tartani a készlet használati utasítását.

12.3 A készlet lejárati ideje 12 hónap.

A melléklet

A.1. táblázat – Az ELISA készlet reagenseinek fogyasztása

reagens, ml

Használt szalagok száma, db.

Oldat elkészítése a tabletta mosásához

FSB-T×25

desztillált víz

Kg-2 oldat készítése munkahígításban

RR-K2

Aljzat munkaoldat elkészítése

Kromogén TMB

Bibliográfia

	Egészségügyi előírások	A Fehérorosz Köztársaság Egészségügyi Minisztériumának 1998. december 16-i 351. sz. A HIV/AIDS problémájával kapcsolatos kérdéseket szabályozó minisztériumi szabályzatok felülvizsgálatáról
	A Fehérorosz Köztársaság Egészségügyi Minisztériumának 2002. november 25-i 165. sz. Az egészségügyi intézmények által végzett fertőtlenítésről, sterilizálásról
	A Fehérorosz Köztársaság Egészségügyi Minisztériumának 2010. április 28-i 47. sz. A munkavállalók kötelező orvosi vizsgálatának eljárásáról szóló utasítás jóváhagyásáról és a Fehérorosz Köztársaság Egészségügyi Minisztériumának egyes határozatainak érvénytelenítéséről

A test állapotának átfogó felméréséhez ELISA diagnosztikai módszert alkalmaznak. Az ELISA vérvizsgálat célja a fertőző, hematológiai, elsődleges és másodlagos immunhiányok diagnosztizálása.

Mi az ELISA elemzés

Sok beteg érdeklődik az ELISA módszer iránt: mi ez, mire való a vizsgálat. Az immunenzimatikus analízist viszonylag nemrég kezdték el alkalmazni. Kezdetben antigénszerkezetek tanulmányozására használták, és csak tudományos célokra végezték. Ezután a tudósok arra a következtetésre jutottak, hogy az enzimek segítségével azonosíthatók a specifikus antitestek, amelyek egy folyamatban lévő betegségre válaszul keletkeznek.

Kezdetben ezt a technikát csak szűk profilú egészségügyi intézmények alkalmazták, elsősorban a vérátömlesztő állomásokon. Különösen fontos az ELISA módszer a HIV-fertőzés kimutatására.

Manapság ez a módszer széles körben alkalmazható. A modern laboratóriumok a következők diagnosztizálására használják:

• daganatok;
• hormonális rendellenességek;
• fertőzések;
• krónikus vagy korábban átvitt fertőző folyamatok;
• helminták.

Ha fertőző folyamat fordul elő a szervezetben, akkor ez a fajta diagnózis a legoptimálisabb a betegség típusának meghatározásához.

A módszer lényege és típusai

ELISA módszer - mi az, mi az ilyen típusú kutatás lényege? Ez és sok más kérdés érdekli a betegeket. Ennek a diagnosztikai módszernek az alapja a szervezet immunsejteknek a fertőző ágensek antigénjéhez való kötődése. A kapott komplexet speciális enzim segítségével határozzuk meg.

Az ELISA-módszer elvének megértéséhez tudnia kell, hogyan megy végbe az antigén-antitest reakció. Az antigén a szervezet számára idegen fehérjemolekula, amely a fertőzéssel együtt kerül be. Az idegen vér részecskéi, amelyek csoportjukban nem egyeznek meg, szintén antigénnek minősülnek. A szervezetben immunválaszt váltanak ki, amelynek célja az idegen anyagok elleni védelem. Ezért az emberi szervezet antitesteket termel - immunglobulinokat, amelyek az antigénekhez kapcsolódhatnak, és immunkomplexet képeznek. Az ilyen vegyületeket az immunsejtek sokkal könnyebben felismerik és elpusztítják.

Az ilyen immunkomplexek jelenlétére vonatkozó reakciót a laboratóriumban végzik, kész vegyületek felhasználásával annak meghatározására, hogy vannak-e hasonlóak a vérben.

Az ELISA módszer lényege meglehetősen egyszerű, azonban annak köszönhetően, hogy számos fertőzés és betegség kimutatására vérvizsgálatot végeznek, több fajtája létezik. Mindegyik különbözik a magatartási rendszerben és a hatályban. Lehet közvetlen vagy közvetett ELISA. A közvetlen módszer azt jelenti, hogy antigénekkel reagáló immobilizált antitesteket használnak. A módszer fő előnye, hogy minden folyamat automatizálható, ami azt jelenti, hogy a diagnosztika egy kis időt vesz igénybe.

Az indirekt módszer azt jelenti, hogy másodlagos antitesteket használnak. A szilárd fázison pedig az antigén immobilizálva van. Az elemzés lehetővé teszi a különböző antigének elleni antitestek meghatározását. Ez segít pontosabb eredmény elérésében, de a módszer összetett.

Tanulmányi előnyök

Az ELISA módszer számos előnnyel rendelkezik a többi diagnosztikai módszerrel szemben. A főbbek a következők:

• nagy érzékenység;
• stabilitás az összetevők tárolása során;
• a diagnosztika sebessége;
• kis mennyiségű vizsgálati anyag használható;
• minden folyamat automatizálható;
• a fertőzés korai szakaszában kimutatható.

Ez a diagnosztikai módszer univerzális, ezért tömeges vizsgálatra is alkalmas. Az elemzés segítségével nyomon követhető a fertőző folyamat lefolyásának dinamikája.

Elemzési és anyagmintavételi jelzések

Az ELISA módszerrel végzett vizsgálat előírható, ha számos betegség gyanúja merül fel:

A vénás vért antitestek jelenlétére vizsgálják. Az elemzés előtt elkülönítik belőle azokat az elemeket, amelyek bonyolíthatják a vizsgálatot. Más biológiai folyadékokból is lehet mintát venni.

A legpontosabb információk megszerzése érdekében a vérvételt éhgyomorra kell végezni. Ha az eljárást a látens fertőzés meghatározására írták elő, akkor néhány héttel az elemzés előtt abba kell hagynia az antibakteriális és vírusellenes gyógyszerek szedését. Az anyag felvételének helye szerinti laboratórium berendezésétől függően az eredmény egy napon belül elérhető. Sürgős esetekben ez az idő néhány órára csökken.

A szifilisz elemzése

Az ELISA módszer segít meghatározni számos fertőzés, különösen a szifilisz jelenlétét a szervezetben. A vizsgálathoz éhgyomorra vénából vesznek vért. Ezután egy olyan vizsgálatot végeznek, amely nemcsak a betegség jelenlétét a szervezetben, hanem a megjelenésének pontos idejét is meghatározza, mivel a betegség során bizonyos antitesteket szigorúan meghatározott sorrendben másokkal helyettesítenek.

A betegség elhúzódó lefolyását jelző akut fázisban, vagy krónikus fertőzés exacerbációja során M típusú immunglobulinokat mutatnak ki a vérben Az A típusú immunglobulinok jelenléte azt jelzi, hogy a fertőzés több mint 4 évig él a szervezetben hétig. A G csoport immunglobulinjai jelzik a betegség vagy a korábbi terápia magasságát.

A lyukak színének mértéke szerint értékelik a fertőző folyamat lefolyásának intenzitását, mivel telítettsége a képződött immunkomplexek számától függ.

HIV teszt

Ebben az esetben is az ELISA módszert használják az elemzésre, bizonyos jellemzői vannak, amelyek a betegség lefolyásához és progressziójához kapcsolódnak. Ezt a kutatási módszert tartják a legelfogadhatóbbnak a meghatározáshoz, de legkorábban egy hónappal a kockázati tényezőknek való kitettség után kell elvégezni. Ennek oka a lappangási idő, amely 45 naptól 6 hónapig tart. Ezért az elemzést hat hónap elteltével meg kell ismételni.

• ascariasis;
• giardiasis;
• toxoplazmózis stb.

Minden előnye ellenére az ELISA módszernek vannak hátrányai is. A fő hátrány az, hogy a vizsgálat során az orvosnak előzetesen feltételeznie kell a betegséget.

Amikor nincs mód arra, hogy véletlenül megtalálják a kórokozót és meghatározzák enzim immunoassay tulajdonságait. A teszt csak az antitestek jelenlétét jelzi a páciens vérében. Ráadásul ez egy meglehetősen költséges elemzés.

Az elemzés megfejtése

A kvalitatív ELISA eredménye vagy az antitestek jelenléte, vagy azok hiánya a vérben. Ha kvantitatív elemzést végzünk, akkor az antitestek koncentrációja vagy számértékben, vagy bizonyos számú + előjelben fejezhető ki.

Ezenkívül olyan mutatók, mint például:

Az IgM indikátor egy akut fertőző folyamat lefolyását jelzi a szervezetben. Teljes hiánya jelezheti a betegség kórokozójának hiányát vagy a krónikus stádiumba való átmenetet.

Az IgA leolvasás negatív IgM teszttel krónikus vagy látens fertőzést jelez. Az IgM és az IgA egyidejű jelenléte azt jelzi, hogy a betegség akut stádiumban van. Az IgG jelenléte a betegség krónikus stádiumba való átmenetét vagy a teljes gyógyulást és az immunitás kialakulását jelzi.

Most már léteznek speciális ELISA-tesztek, amelyeket saját maga is elvégezhet.

S.N. IGOLKINA, V.F. PUZYREV, L.G. ZININA, N.M. DENISOVA, A.N. BURKOV,

A.P. OBRYADINA, T.I. ULANOVA
LLC "Diagnosztikai rendszerek Tudományos és Termelő Egyesület",

Nyizsnyij Novgorod
"DS-ELISA-HBeAg" és "DS-ELISA-anti-HBe" ENZIMIMMUNTESZT-RENDSZEREK AZ AKUT ÉS KRÓNUS HEPATITIS B SPECIFIKUS DIAGNOSZTIKAI ÉS ELŐREJELZÉSÉRE
A hepatitis B egy vírusos fertőző betegség, amelyet súlyos

gyulladásos májbetegség. A halálozások körülbelül 1%-a ben következik be

a betegség akut periódusa, az esetek 4-10% -ában krónikussá alakul át

folyamat lehetséges kialakulását későbbi cirrhosis a máj és az elsődleges

hepatocarcinomák.

Az akut hepatitis B előfordulási gyakoriságának csökkenő tendenciája ellenére továbbra is kialakul egy epidemiológiailag veszélyes betegcsoport, akiknél először diagnosztizálnak krónikus vírusos hepatitist, valamint a betegség kórokozóját hordozók csoportja. Továbbra is kedvezőtlen prognózis kapcsolódik a hepatitis B magas előfordulási gyakoriságához a reproduktív korú lakosság körében, valamint a serdülők körében.

Ezért a hepatitis B kezelésének, megelőzésének és diagnosztizálásának kérdései ma különösen aktuálisak.. Jelenleg az enzim immunoassay módszereket széles körben alkalmazzák a fertőzés markereinek kimutatására. A HBV legfontosabb szerológiai markerei közé tartozik az e-antigén (HBeAg) és az e-antigén elleni antitestek (anti-HBe). A HBeAg magas vérfertőzéssel jár, ami a hepatitis B vírus (HBV) aktív replikációját jelzi. Megállapítást nyert, hogy a magas HBeAg titerek magas DNS-polimeráz aktivitásnak felelnek meg, és mindig a teljes Dane-részecskék kimutatásával kombinálódnak. Ha a HBeAg-ot tartalmazó szérum egy egészséges ember vérébe kerül, a fertőzés kockázata sok nagyságrenddel nagyobb, mint a szerokonverzió után.

Akut hepatitis B esetén a HBeAg a fertőző folyamat korai szakaszában már a betegség első klinikai megnyilvánulásainál kimutatható a vérben, egy héttel a HBsAg megjelenése után. A ciklikus lefolyású akut hepatitis B-t (AHB) a HBeAg rövid távú keringése jellemzi. Hamarosan, az icterikus periódus 2-3 hetében megjelenik az anti-HBe, ami lehetővé teszi a betegség kedvező kimenetelének előrejelzését.

Az anti-HBe 2-5 évig, ritkábban több hónapig kering a vérben.

A HBeAg-antiHBe szerokonverzió kezdete az aktivitás meredek csökkenését jelzi

fertőző folyamat. A HBeAg kimutatása a betegek vérében a betegség 2 hónapja után a kóros folyamat krónikusságát jelzi. Ebben az esetben az anti-HBe kialakulhat sok évvel a HBcAg elleni antitestek megjelenése után, vagy egyáltalán nem mutatható ki.

Az anti-HBe megjelenésének kedvezőtlen prognosztikai értéke lehet

A HBV akut periódusa súlyos formákban, ami megfelel a mag előtti zóna mutációjának

a HBV "e-" törzs kialakulása.

cél ez a munka nagyon érzékeny és specifikus fejlesztése volt

ELISA tesztrendszerek HBeAg és anti-HBe kimutatására és főbb jellemzőik értékelésére.

Anyagok és metódusok.

1. Enzim immunoassay tesztrendszer "DS-ELISA-HBeAg". Érvényes tesztindítás

a rekombináns HBeAg poliklonális kecske antitestjei, amelyeket az NPO Diagnostic Systems, Nyizsnyij Novgorod, szilárd fázison adszorbeálnak, és egy konjugátum, amely poliklonális kecske antitest a rekombináns HBeAg ellen, torma-peroxidázzal jelölt, amelyet az NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod gyárt. Az elemzési séma egylépcsős "szendvics", a teljes reakcióidő 1,5 óra. A szérummintát hígítatlanul elemzik.

2. ELISA tesztrendszer "DS-ELISA-anti-HBe". A teszt alapja az

rekombináns HBeAg (AHBV 102), amelyet az NPO Diagnostic Systems gyárt,

Nyizsnyij Novgorod, szilárd fázison adszorbeálva és torma-peroxidázzal készült anti-IgG konjugátum, a Sorbent Service, Moszkva. A reakció két szakaszban megy végbe. A tesztszérumot 1/10-es hígításban az immobilizált antigénhez adjuk, majd inkubálás és a nem kötött komponensek eltávolítása után a specifikus immunkomplexeket torma-peroxidázzal jelölt humán IgG elleni egér monoklonális antitestek segítségével detektáljuk.

3. A kifejlesztett tesztrendszerek értékeléséhez 2178 szérummintát használtunk

vér. Ebből 480 minta egészséges donortól származott. 1680 minta képviseli

a hepatitis B vírus különböző markereit tartalmazó vérszérumminták.

Idővel tizennyolc mintát vettek olyan betegektől, akiknél akut vírusos hepatitis B klinikai diagnózisa volt. Korábban minden mintát megvizsgáltak HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc jelenlétére az NPO Diagnostic Systems, Nyizsnyij Novgorod által gyártott tesztrendszerekkel: "ELISA-HBsAg / m", "DS-ELISA-HBeAg", " DS-ELISA-anti-HBe", "ELISA-anti-HBc".

4. A kifejlesztett tesztrendszerek összehasonlító értékelését a

kereskedelmi gyógyszer "Monolisa HBe", amelyet a BIO-RAD, Franciaország gyárt;

Eredmények és vita. Az NPO "Diagnostic Systems" 2 új diagnosztikai készletet fejlesztett ki: "DS-ELISA-HBeAg" és "DS-ELISA-anti-HBe". A "DS-ELISA-HBeAg" tesztrendszer a hepatitis B vírus e-antigénjének kimutatására szolgál az emberi vér szérumában (plazmában) enzim-immunoassay segítségével, és specifikus diagnózisra, a fertőző folyamat aktivitásának meghatározására használható. , amely előrejelzi a hepatitis B súlyosságát és kimenetelét.

A "DS-ELISA-anti-HBe" tesztrendszert a hepatitis B vírus e-antigénje elleni IgG antitestek kimutatására tervezték humán szérumban (plazmában) és

a fertőző folyamat lefolyásának előrejelzésére és a hepatitis B folyamatban lévő terápia nyomon követésére használják.

Az új tesztek specifitásának tanulmányozásához megbecsültük az eloszlást

tartalmazó és nem tartalmazó vérszérumminták optikai sűrűsége (OD).

HBeAg vagy anti-HBe. Egészséges donorok vérszérummintáit és a hepatitis B vírus különböző markereire kiválasztott vérszérummintákat használtuk.

vérátömlesztési állomások. A vizsgálat eredményei a két populáció jelentős elkülönülését mutatták ki. A HBeAg-t nem tartalmazó szérumminták OD értékei 0,011 és 0,111 között, a HBeAg-t tartalmazó szérumminták fő csúcsa 2,186 és 3,186 között mozgott (1a ábra).

1a. Tartalmazó és nem tartalmazó szérumminták OD megoszlásaHBeAga "DS-ELISA-" tesztrendszerbenHBeAg»
Az alacsony OD (0,3-0,6) szérumok csoportjának megfelelő csúcs valószínűleg a fertőzési folyamat korai szakaszában vett szérumminták.

Már a lappangási időszakban is rendszeresen regisztrálják a HBsAg-t és a HBeAg-t a betegek vérében, ami megerősíti potenciális epidemiológiai veszélyüket.

Az anti-HBe-t nem tartalmazó szérumminták optikai sűrűségtartománya

0,002 és 0,122 közötti tartományban volt, és az anti-HBe-t tartalmazó szérumminták fő OD csúcsa 2,431 és 3,231 között volt (1b. ábra).

Rizs. 1b. Az anti-H-t tartalmazó és nem tartalmazó szérumminták OD eloszlásaLenni, a "DS-ELISA-anti-" tesztrendszerbenHBeAg»
Az anti-HBe pozitív minták OD eloszlásának jellemzőit tanulmányoztuk.

szérum, amely ( n=78), és nem tartalmaz HBsAg-t ( n=56).


Rizs. 2a. HBe-pozitív szérummintákat tartalmazóHBsAga "DS-ELISA-anti-" tesztrendszerbenHBe».

2b. Az OP anti-HBe-pozitív szérumminták, amelyek nem tartalmaznak HBsAga tesztrendszerben "DS-ELISA-anti-HBe».
A HBsAg-t nem tartalmazó anti-HBe-pozitív szérumminták 87%-ának optikai sűrűsége 0,41 és 0,81 között volt (2b. ábra). Ugyanakkor a HBsAg-t tartalmazó anti-HBe-pozitív szérumminták mindössze 14%-ának volt OD ebben a tartományban (2a. ábra). Ismeretes, hogy a késői lábadozás fázisában, ahol a HBsAg-re negatív reakció lép fel, fokozatosan csökken a HBeAg elleni antitest-titer (2b. ábra). Ezért lehetséges, hogy az anti-HBe-pozitív minták túlnyomó koncentrációja 0,8-nál kisebb OD-nek felel meg.

A kapott adatok a pozitív és a szétválasztás megbízhatóságát jelzik

negatív vérszérumminták a betegség stádiumától függetlenül. A "DS-ELISA-HBeAg" és a "DS-ELISA-antiHBe" tesztrendszerek érzékenységének és specificitásának vizsgálatát a "Monolisa HBe" teszttel ("BIORAD", Franciaország) összehasonlítva végeztük (1. táblázat).

Asztal 1
Az érzékenység és a specificitás összehasonlító jellemzői

tesztrendszerek DS-ELISA-HBeAg és DS-ELISA-antiHB

Index	A HBeAg definíciója		Az anti-HBe definíciója
	NPO "DS", DS-ELISA-HBeAg	BIO-RAD, "Monolisa HBe"	NPO "DS", DS-ELISA-antiHBe	BIO-RAD,
Mennyiség kutatott minták	67	67	32	32
Kiderült pozitív minták	47	47	16	16
Kiderült negatív minták	20	20	16	16

Az 1. táblázatban látható adatok 100%-os egyezést mutatnak az eredmények között.

Ismeretes, hogy a HBeAg és az anti-HBe kombinált indikációja, különösen azok kvantitatív értékelése, további prognosztikai értékkel bír. Az anti-HBe titer gyors növekedése az aktív humorális immunválaszt jellemzi, és gyakorlatilag kiküszöböli a krónikussá válás veszélyét. Elemeztük a HBeAg/anti-HBe tartalom változását akut vírusos hepatitis B klinikai diagnózisú betegek vérszérummintáiban (2. táblázat).

2. táblázat
A HBeAg/anti-HBe szerokonverzió dinamikája akut hepatitis B-ben szenvedő betegeknél

Megvizsgálták beteg	A vérvétel napja*	HBeAg	HWe-ellenes Ref./Opt.		Anti-HBc	anti- HBc IgM
	1	1,4+	2,1+	+	+	+
	12	0,5-	1,0+	+	+	+
	21	0,3-	1,3+	+	+	+
	1	1,2+	1,2+	+	+	+
	5	0,4-	1,0+	+	+	+
	13	0,2-	2,5+	+	+	+
	1	1,2+	0,6-	+	+	+
	21	0,2-	4,6+	+	+	+
	30	0,2-	9,7+	+	+	+
	1	2,1+	0,5-	+	+	+
	8	0,6-	1,1+	+	+	+
	28	0,3-	2,8+	+	+	+
	1	0,7-	2,2+	+	+	+
	8	0,3-	2,2+	+	+	+
	15	0,3-	2,8+	+	+	+
	38	0,2-	3,0+	+	+	+
6	1	1,1+	4,4+	+	+	+
	14	0,5-	3,8+	+	+	+

* a kórházi felvételtől
Minden szérummintát teszteltünk szerológiai markerek jelenlétére.

OGV: HBsAg, anti-HBc, anti-HBc IgM. A megfigyelési időszak 13 és 38 nap között változott. Az 1., 2. és 6. betegekben az anti-HBe már a HBeAg titer csökkenésének hátterében is kimutatható volt. A 3. és 4. betegekben az anti-HBe a HBeAg vérszérumból való eltűnése után jelent meg a 21. és 8. napon. Az 5. számú beteg vérszérumában a HBeAg kimutatásának elemzése a kórházba történő felvételkor negatív eredményt mutatott. Ugyanakkor az anti-HBe-re való átállást már a vizsgálat első napján regisztrálták.

Minden alany tendenciát mutatott a HBeAg elleni antitestek titerének növekedése felé

vérszérum, amely lehetővé teszi a klinikai folyamat kedvező dinamikájának előrejelzését

az OGV megnyilvánulásai és a gyors gyógyulás.

Az új tesztrendszerek tanulmányozása megmutatta azok magas diagnosztikai megbízhatóságát. A DS-ELISA-HBeAg" és a "DS-ELISA-antiHBe" összehasonlítás eredménye 100%-os egyezést mutatott a "Monolisa HBe" teszttel.

A hepatitis B-ben szenvedő betegek szérummintáinak vizsgálatában dinamikában, tesztekben

megerősítette a magas érzékenységet és specificitást.

A vizsgálati minták és a konjugátum rövid inkubációs ideje (1 óra) lehetővé teszi, hogy a lehető legrövidebb időn belül meghatározzuk a terápiás intézkedések helyes taktikáját. Az elkészített tesztrendszerek könnyen felállíthatók, gazdaságosak (a HBeAg meghatározásához 50 µl szérum, az anti-HBe meghatározásához 10 µl szérum szükséges). A tesztek kiváló minőségi jellemzői lehetővé teszik azok sikeres alkalmazását a fertőzési folyamat lefolyásának előrejelzésében és a hepatitis B folyamatban lévő terápia monitorozásában.
IRODALOM

1.Mayer K.P. Hepatitis és a hepatitis következményei / K.P. Mayer.– M., GEOTAR, Medicina, 1999.- C.720

2.Onishchenko G.G. A vírusos hepatitis terjedése, mint nemzetbiztonsági veszély / G.G. Onishchenko, L.A. Dementieva // Mikrobiológiai folyóirat. –2003.-4. sz.- P.93-99.

3.Sorinson S.N. Vírusos hepatitis / S.N.Sorinson. - Szentpétervár, Teza, 1997.- 306 p.

4. Baumeister M. Hepatitis B vírus és antigénspecifikus epitópok és a kereskedelmi forgalomban kapható anti-HBe immunoassays korlátai / M. Baumeister // Journal of Medical Virology.- 2000.-N 60.- P.256-263.

5.Kane M. Globális program a hepatitis B fertőzés leküzdésére / M. Kane// Vaccine. - 1995.-N131(1. melléklet).- R.47-6. Shunichi SzoO. Hepatitis B vírustörzsek mutációkkal a Core Promoterben fulmináns hepatitisben szenvedő betegeknél / Shunichi Sato, Kazuyuki Suzuki // Annals of Internal Medicine. - 1995.- N122.- R.241-248.

7. Ou J.-H. A hepatitis B vírus e antigén molekuláris biológiája./ J.-H.Ou // Journal of Gastroenterology and Hepatology. - 1997.- 12. sz. (1. melléklet) - R. 178-187.

8.Tiollais P. A hepatitis B vírus. / P.Tiollais, C.Pourcel, A.Dejean // Természet. - 1985. - P.317, 489-495
Megjelent: Zh. "Klinikai laboratóriumi diagnosztika" - 2005.-№6-S.-34-37

A HIV a mi generációnk csapása. Milyen módszerek léteznek a HIV diagnosztizálására, részletes információk a HIV ELISA-tesztjéről. Hogyan kell venni, hogyan kell értelmezni az elemzés eredményeit.

Az emberi immunhiány vírus generációnk egyik legrettegettebb fertőzése.

A HIV romboló hatással van immunrendszerünkre,és ha a betegség előrehaladását nem állítják meg időben, akkor szerzett immunhiányos szindrómává alakulhat át. A HIV a szexuális kapcsolat során a partnerek közötti közvetlen érintkezés útján terjed a férfi és női nemi szerveken keresztül. A fertőzés másik oka lehet a vírus bejutása a véren keresztül. Ez a nem steril eszközök használatának, a fertőzött vér transzfúziójának köszönhető, sőt generációkon át: fertőzött anyától szoptatás alatti gyermeknek.

Eddig a tudósok szerte a világon azon töprengenek, hogy új generációs gyógyszereket hozzanak létre, amelyek képesek meggyógyítani az AIDS-et, azonban a tudományos fejlődés nagy üteme ellenére az emberi immunhiány vírusa továbbra is terjed a bolygón.

ELISA - egy módszer a HIV diagnosztizálására

A 20. század generációjának tudósai számos módszert dolgoztak ki a HIV diagnosztizálására, amelyek közül a legfontosabbat tartják. kapcsolt immunszorbens vizsgálat. A HIV ELISA-t viszonylag nemrégiben kezdték el - a kilencvenes évek elején - végezni. Idővel a módszer csiszolódott, új részletekre tett szert. Most az ELISA módszer megbízhatósága az egyik legmagasabb - körülbelül 98%. Ennek megfelelően ezt a módszert egyre gyakrabban alkalmazzák.

Az ELISA az első teszt, amellyel a páciens HIV-teszt során találkozik. Az ELISA módszer meghatározza az antitestek jelenlétét a vérben. Ha a teszt antitestek jelenlétét állapítja meg a vérben, akkor a vírus jelen van. Az ezzel a teszttel kapcsolatos információkat azonban más vizsgálatoknak is alá kell támasztani, mint például az immunblot (IB) és a legújabb generációs módszer, a polimeráz láncreakció (PCR).

Az antitestek speciális fehérjevegyületek, amelyeket a plazmasejtek termelnek a szervezetbe jutó fertőzésre adott reakció után (az antitestek a fertőzés után 1-2 hónappal kezdenek képződni).

A HIV okai

Az orvos beutalót ír Önnek elemzésre, ha kapcsolatba került HIV-fertőzött személlyel, vagy fennáll a fertőzés veszélye. A HIV-fertőzés kockázatának kitett emberek generációi a következők:

• egy hónapon belül injekciós kezelésen esik át;
• szexuális kapcsolat tartása speciális védelmi eszközök nélkül;
• szexuális érintkezés során átvitt fertőzések hordozói;
• betegek vérátömlesztés vagy injekció után, hogy felfedezzék a nyolcvanas években a véralvadás okát.

Ha kétségei vannak HIV-státuszával kapcsolatban, és félelmei vannak a fertőzés lehetőségével kapcsolatban, javasoljuk, hogy azonnal kérjen segítséget hazánk bármely egészségügyi intézményétől átfogó HIV-teszt elvégzéséhez. A vizsgálatok eredménye egy hónapon belül megérkezik. A HIV-fertőzés kockázatának kitett személyeknek 4 havonta ajánlott a szűrés.

Hogyan készítsünk elemzést

Nincs külön előkészület a HIV-vérvizsgálat elvégzésére, de jobb kövesse az egyszerű szabályokat:

• jobb, ha nem eszik este, hanem reggel éhgyomorra vesz egy elemzést;
• nem tanácsos a testet fizikai munkával terhelni;
• enni egészséges ételeket, tartózkodni a cigarettától és az alkoholtól egy ideig;
• a hamis vizsgálati mutatók kizárása érdekében ne végezzen elemzést a súlyos betegségek kezelése után.

Az emberi immunhiány vírus fertőzése súlyos diagnózis. A hibás diagnózis katasztrofális következményekkel járhat. A HIV ELISA-analízise a legelérhetőbb kutatási módszer, de nem minden esetben informatív.

ELISA - enzim immunoassay. Az ELISA módszer feladata az immunhiányos vírus elleni antitestek kimutatása biológiai anyagokban. A módszer segítségével nem maguknak a vírusoknak, hanem csak a jelenlétükre válaszul termelődő antitesteknek a folyadékban való jelenlétét lehet nyomon követni. Az ELISA-t széles körben használják az STD-k diagnosztizálására. Segít azonosítani a nemi úton terjedő betegségeket.

Az ELISA-nak többféle típusa létezik: direkt variáns, indirekt variáns, szendvics módszer. Mindenesetre a technika az antitestek jelenlétének meghatározásán alapul, amelyek az idegen ágens behatolásának indikátoraként szolgálnak. Ezen "nyomok" feltárása érdekében a biológiai komponenst enzimekkel kezelik.

Az ELISA 96-98%-os pontossággal detektálja az antitesteket, a hiba elhanyagolható. Ez 2-4%.

ELISA - egy módszer a HIV diagnosztizálására

A HIV ELISA-analízise a diagnózis első szakasza. Az immunhiányos vírus antigénjei a p24, p15, p17, p31 fehérjék és a gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160 glikoproteinek.

A vírusfehérje kimutatásához a vér egy részét vénából veszik. Az ELISA vérvizsgálatra küldött mintát enzim immunoassay reagensekkel kezelik. A szérumot izolálják a vérből. Ha a vizsgálat során megtalálják őket, akkor a vírus már jelen van a vérben.

A vért szigorúan üres gyomorra adják. 2 nappal az elemzés előtt nem ajánlott zsíros ételeket enni és alkoholt inni. 14 napon belül abba kell hagynia a vírusellenes gyógyszerek szedését.

A módszer előnyei:

• viszonylag alacsony költség;
• a reagensek nagy stabilitása;
• nagy érzékenység;
• rövid átfutási idő;
• az emberi tényező minimális befolyása.

A modern ELISA tesztrendszereket a világszabványoknak megfelelően gyártják. Ez javítja a módszer pontosságát.

Az ELISA nem mindig ad megbízható eredményt. Miután a vírus bejut a vérbe, megkezdődik a fejlődés látens (rejtett) szakasza. Azt az időszakot, amíg a vírusok el nem kezdenek szaporodni, és még nem képződnek antitestek, „szeronegatív ablakidőnek” nevezik. Ebben a szakaszban értelmetlen ELISA-t végezni. Ha fertőzés történt, az eredmény . Az, hogy a vírus milyen gyorsan észleli magát, attól függ, hogy hány veszélyes sejt került a szervezetbe. Védetlen közösülés vagy fertőzött vér transzfúziója esetén ez az időszak minimális lesz.

A HIV ELISA-vizsgálatának nagy megbízhatósága érdekében a vizsgálatot háromszor végzik el. A humán immunhiány vírus ELISA-vizsgálatának határideje:

• 6 héttel a valószínű érintkezés után,
• 3 hónap alatt,
• hat hónappal később.

A HIV 4. generációs ELISA-vizsgálata a leginformatívabb módszer a fertőzés korai szakaszában. Már 1 hónappal az állítólagos fertőzés után elvégezhető. A teszt drága a 3. generációs megfelelőhöz képest. Ezért az állami egészségügyi intézményekben kiegészítő diagnosztikai módszerként használják. A 3. tesztet ingyenesen végezzük el, ha az eredménye alapján nem lehet egyértelmű választ adni, a beteget 4. generációs ELISA-ra küldjük.

Fontos! Közvetlenül a fertőzés után egy személy fertőzővé válik. Veszélyes másokra, még akkor is, ha még nem tud a diagnózisáról!

Ha az ELISA során HIV-antigénekkel szembeni antitesteket mutatnak ki, további vizsgálatokra van szükség. Ezek közé tartozik. Ennek a módszernek a megbízhatósága 80%. PCR segítségével vért, spermát és hüvelyváladékot vizsgálnak. A biológiai folyadékot egy orvosi reaktorban hasítják, majd enzimkezelésnek vetik alá. Ennek eredményeként adatokat kapunk a HIV-sejtek koncentrációjáról folyékony közegben. A nagy hiba (20%) miatt pozitív eredménnyel kiegészítve immunblotot is végeznek.

A következő diagnosztikai lépés a Combo teszt (vagy immunblot). Ez egy nagyon érzékeny vizsgálat (98%-os megbízhatóság), és akkor kell elvégezni, ha az ELISA eredményei nem meggyőzőek 6 hónap után.

Az ELISA eredmények értelmezése

A visszafejtési idő 24-48 óra. Ha sürgős információszerzésre van szükség (sebészeti beavatkozás szükséges), a dekódolás 2 órán belül megtörténik. A tartományi orvosi állomások nem mindig rendelkeznek a szükséges reagensekkel. A mintavétel a keringés helyén történik, majd a regionális központba kerül. Ilyen körülmények között az eredmény 1-2 hét alatt látható.

Az enzim immunoassay eredménye lehet pozitív vagy negatív; nincs más lehetőség.

Még ha az eredmény pozitív is volt az elsődleges és az ismételt ELISA során, a beteg nem ismerhető fel HIV-fertőzöttnek. Lehetséges hiba. A hamis pozitív eredmény okai:

• krónikus betegségek;
• elhúzódó fertőző betegségek;
• terhesség.

Ezért az elemzés eredményét további vizsgálatokkal kell tisztázni.

Ha a HIV immunoblot (reaktív) során egy személy HIV-fertőzöttnek minősül, ami azt jelenti, hogy egészséges.

A vírus sejtjei végül alkalmazkodnak az előírt gyógyszerekhez. Az ellenőrzés érdekében az ELISA tesztet időszakonként meg kell ismételni.

Néha az immunblot hamis negatív eredményt mutat. Rendkívül ritka immunhiányos vírus 6 hónapos (vagy több). Ez akkor lehetséges, ha kis mennyiségű vírussejt került a véráramba. Az összes eset 0,5%-ában csak egy év múlva lehet fertőzést diagnosztizálni. A fertőzést követő hat hónapon belül 99,5%-ban az ELISA megbízható eredményt ad.

Még nagy pontosságú vizsgálatok esetén is van 2%-os hibahatár. Nem szabad megfeledkeznünk az emberi tényezőről sem. A hibalehetőség kiküszöbölésére a teszt 2 különböző intézményben végezhető el.