Sistemele de testare ELISA „ds-ifa-hbeAg” și „ds-ifa-anti-hbe. Sisteme de testare produse de SRL Sisteme de diagnosticare „npo” Cerințe pentru spălarea plăcii

1 Setați atribuirea

1.1 Trusa este destinată detectării simultane a anticorpilor împotriva virusului imunodeficienței umane de primul și al doilea tip (HIV-1 și HIV-2) și a antigenului HIV-1 p24 în ser și plasmă umană „in vitro” prin enzime indirecte- test imunosorbent legat.

2 Caracteristicile și principiul de funcționare a ansamblului

2.1 Compoziția setului:

Numele componentei	Cantitate
Imunosorbent	2 tablete
Probă de control pozitiv AT (K + AT)	1 flacon, 3 ml
Probă de control pozitiv AG (K + AG)	3 flacoane, preparat liofilizat
Probă de control negativă (LA -)	2 sticle de 3 ml
Soluția conjugată #1 (RK-1)	1 flacon, 12 ml
Conjugatul #2 (Kg-2)	1 flacon, 1 ml
Soluția de diluare a conjugatului nr. 2 (RR-K2)	2 sticle de 18 ml
tampon de substrat ( BRS)	2 sticle de 18 ml
Cromogen TMB	1 flacon, 1 ml
Tween Concentrat Tampon Fosfat (FSB-T×25)	2 sticle de 50 ml
Opriți reactivul	1 flacon, 12 ml
Kit de baie de reactivi cu vârfuri pentru pipete multicanal	1 trusa
Film adeziv

2.2 Principalele componente ale trusei „ELISA-HIV 1.2 AGAT” sunt imunosorbente, soluția de conjugat nr. 1 și conjugatul nr. 2.

Imunosorbent este o tabletă de polistiren, în godeurile căreia este adsorbit un amestec de antigene recombinate HIV-1 (gp41) și HIV-2 (gp36) și anticorpi monoclonali la antigenul HIV-1 p24.

Soluția conjugată #1 este un amestec de anticorpi umani monoclonali marcați cu biotină împotriva antigenului HIV-1 p24 și proteine ​​HIV-1 și HIV-2 recombinante marcate cu biotină.

Conjugatul #2 este streptavidina conjugată cu peroxidază de hrean.

Probă de control pozitiv AT- ser din sânge uman care conține anticorpi la HIV-1 și HIV-2, care nu conține anticorpi la virusul hepatitei C și Treponema pallidum, antigenul HIV-1 p24 și antigenul HBs, inactivat prin încălzire timp de 3 ore la o temperatură de 56 ºC.

Probă de control pozitiv AG– ser din sânge uman care conține antigenul nativ p24 HIV-1, care nu conține anticorpi la HIV-1, HIV-2, virusul hepatitei C și antigenul Treponema pallidum și HBs, inactivat prin încălzire timp de 3 ore la o temperatură de 56 ºC.

Probă de control negativă– ser din sânge uman care nu conține anticorpi împotriva antigenului HIV-1, HIV-2, HCV, HIV-1 p24 și antigenului HBs, inactivat prin încălzire timp de 3 ore la o temperatură de 56 ºC.

Principiul de funcționare al setului. Când o soluție de conjugat nr. 1 și probe de ser de sânge infectat sunt introduse în godeurile tabletei, antigenul p24 se leagă atât de anticorpi specifici din faza solidă, cât și de anticorpi monoclonali biotinilați anti-p24 care fac parte din soluția de conjugat. Numarul 1; Anticorpii specifici HIV se leagă atât la antigenele recombinate HIV-1 și HIV-2 adsorbite pe faza solidă, cât și la antigenele incluse în soluția de conjugat nr. 1, formând complexe antigen-anticorp. Complexele imune de anticorpi specifici anti-p24 și antigenul p24 sunt detectate prin conjugatul nr. 2. După spălarea componentelor nelegate, în godeurile plăcii se adaugă o soluție de substrat de peroxidază (peroxid de hidrogen) și cromogen TMB.

Reacția peroxidazei este oprită prin adăugarea unui reactiv de oprire (soluție de acid sulfuric 0,9 M) și intensitatea culorii soluției din godeuri este măsurată pe un spectrofotometru ca valoare a densității optice (OD) la o lungime de undă de 450 nm.

Valoarea DO este direct proporțională cu concentrația de anticorpi specifici și/sau antigen p24 dintr-o probă de ser sau plasmă. Cu cât este mai mare conținutul de anticorpi și/sau antigen p24 în proba de ser, cu atât este mai mare intensitatea colorării.

2.3 Setul este conceput pentru a ține pentru a ține 24 de producții ELISA: 1 set - 1 bandă (8 găuri). Total - 192 definiții inclusiv probele de control.

3 Măsuri de precauție la utilizarea trusei

3.1 Toate componentele trusei în concentrațiile utilizate sunt netoxice. Cu toate acestea, lucrați cu toate probele testate de ser uman (plasmă), care ar trebui considerate ca potențial infectate, capabile să stocheze și să transmită HIV, virusul hepatitei B sau orice alt agent patogen al infecției virale, cu soluții și lichide uzate, diverse echipamente care pot a fi contaminat în procesul de analiză necesită anumite măsuri de securitate la utilizarea kit-ului:

Lucrările trebuie efectuate într-o încăpere special echipată;

Este necesar să se lucreze cu utilizarea echipamentului individual de protecție și cu respectarea măsurilor de precauție în conformitate cu cerințele , , și .

3.2 Reactivul Stop care conține acid sulfuric este iritant. În cazul contactului cu pielea și mucoasele, clătiți imediat cu multă apă.

3.3 Când se lucrează cu kitul, locurile de muncă trebuie să fie prevăzute cu ventilație de alimentare și evacuare.

3.4 Toate persoanele care lucrează în laborator cu truse trebuie să fie supuse unui examen medical obligatoriu în conformitate cu cerințele.

3.5 Deșeurile medicale și/sau kiturile expirate neutilizate trebuie eliminate în mod corespunzător.

4 Reguli pentru lucrul cu un set

4.1 Pentru a exclude rezultatele false, probele de testare trebuie să fie pregătite și depozitate în condiții care împiedică dezvoltarea bacteriilor. Probele de ser care conțin componente de ser agregate sau sedimente trebuie clarificate prin centrifugare timp de (5-10) minute la 3000 rpm. Probele de ser pot fi păstrate la (2-8) °C timp de cel mult 5 zile. Probele congelate (de preferință la o temperatură de cel puțin minus 20 °C) pot fi păstrate cel mult 1 an. Ciclurile repetate de îngheț-dezgheț ale probelor trebuie evitate.

Trebuie amintit că probele cu hemoliză, hiperlipidemie, creștere bacteriană, precum și cele depozitate timp îndelungat fără înghețare nu sunt potrivite pentru analiză.

Fiabilitatea rezultatelor depinde de următoarele reguli:

Nu este permisă utilizarea trusei după data de expirare, precum și amestecarea componentelor truselor din diferite serii;

Pentru prepararea fiecărui reactiv trebuie folosit un recipient separat;

Nu tratați toate ustensilele folosite pentru prepararea reactivilor cu dezinfectanți și detergenți. Dacă este necesar, clătiți cu apă de băut, apoi clătiți de cinci ori cu apă distilată;

Pentru a lucra cu cromogenul TMB și RX, este necesar să folosiți recipiente separate pentru soluții, vârfuri de pipetă și vase.

Trebuie avut grijă să amestecați bine reactivii;

Timpul dintre umplerea și golirea godeurilor plăcii cu soluții și reactivi trebuie să fie de cel puțin 30 s. Nu este permisă uscarea godeurilor în toate etapele setării ELISA;

Când utilizați mașina de spălat, urmăriți starea recipientului pentru soluția de spălare a plăcii și a furtunurilor de conectare: acestea nu trebuie să prezinte semne de creștere a bacteriilor sau fungilor;

Este necesar să se utilizeze pipete automate cu vârfuri interschimbabile, certificate pentru valoarea dozei medii și convergența rezultatelor pipetării (eroarea nu mai mult de 3%);

Dozatoarele și suprafețele de lucru trebuie tratate cu o soluție cu o fracțiune de volum de alcool etilic de 70%. Nu utilizați cloramină și alte substanțe care conțin clor;

Se recomandă utilizarea vârfurilor de pipetă de unică folosință pentru manipularea probelor de testare și de control. Fiecare probă de ser, precum și reactivii trusei, trebuie colectate cu un vârf separat.

Când introduceți în godeurile de PK-1, nu atingeți suprafața tabletei și soluția din godeuri cu vârful pipetei.

În timpul analizei, evitați lumina directă a soarelui pe suprafața de lucru.

4.2 La deschiderea și dizolvarea componentelor liofilizate, este necesar să se asigure că nu rămâne substanță uscată pe capacul și pereții flacoanelor.

5 Echipamente și materiale necesare pentru analiză

5.1 Spectrofotometru cu scanare verticală, care permite măsurarea densității optice a soluțiilor din godeurile tabletei la o lungime de undă de 450 nm;

Dispozitiv semi-sau automat pentru spalarea tabletelor (masina de spalat);

Termostat de aer uscat tip TC-80 M2, menținând o temperatură de (37 ± 1) ° C, sau caracteristici similare;

Pipete automate cu un singur canal cu vârfuri interschimbabile, permițând preluarea volumelor de lichid de la 0,01 la 5,0 ml;

Pipete automate cu 8 canale cu vârfuri interschimbabile, permițându-vă să selectați volume de lichid de până la 0,5 ml;

Cilindru dozator cu o capacitate de 2000 ml;

Balon de laborator cu o capacitate de 2000 ml;

Sticle de sticla cu o capacitate de 20 ml;

Tavi pentru reactivi sau vase Petri (diametru 100 mm);

Vată higroscopică medicală;

Hârtie de filtru;

Mănuși chirurgicale din cauciuc;

Soluție cu o fracție volumică de alcool etilic 70%;

Soluție cu o fracție de masă de peroxid de hidrogen 6%;

apă deionizată sau distilată;

Container pentru colectarea deșeurilor solide;

Recipient pentru scurgerea deșeurilor lichide.

6 Pregătirea pentru analiză

6.1 Scoateți trusa de reactivi din frigider înainte de analiză, deschideți capacul cutiei și păstrați componentele kit-ului la o temperatură (18-25) °C timp de 30 min.

Amestecați bine toate probele de ser (plasmă) și reactivii înainte de testare.

Consumul de reactiv al trusei de testare, care este determinat de numărul de benzi utilizate, este prezentat în tabelul A.1 din apendicele A.

6.2 Prepararea soluției de spălare a plăcilor

Atenţie! Pregătiți soluția pentru spălarea plăcii cu 15 minute înainte de începerea analizei!

Dacă flaconul cu FSB-T × 25 conține un precipitat, acesta trebuie încălzit înainte de utilizare la o temperatură de (37 ± 1) ° C până când precipitatul este complet dizolvat. Într-un cilindru de măsurare cu o capacitate de 2000 ml, adăugați conținutul flaconului cu FSB-T × 25, apoi adăugați apă distilată până la semn. 1250 mlși amestecați ușor soluția. Soluția poate fi păstrată la (2-8) °C timp de 72 de ore.

În cazul utilizării uneia sau mai multor benzi, agitați puternic conținutul flaconului cu FSB-T × 25 timp de (20-30) s, luați volumul necesar de soluție (Tabelul A.1) într-o cană de măsurare sau cilindru. , adăugați cantitatea necesară de apă distilată și amestecați soluția . FSB-T×25 nefolosit poate fi păstrat într-un flacon închis la o temperatură de (2-8) °C în timpul termenului de expirare a kitului.

6.3 Prepararea imunosorbantă

Imunosorbentul este gata de utilizare.

Deschideți pachetul și instalați numărul necesar de benzi pe cadru. Păstrați benzile rămase într-o pungă închisă ermetic cu un desicant la (2-8) °C timp de 3 luni.

6.4 Prepararea K + AT, K - , RK-1, PP-K2, BRS și reactiv de oprire

K + AT, K - , RK-1, RR-K2, BRS și reactivul de oprire sunt gata de utilizare.

Atenţie! Precipitarea este posibilă într-un flacon cu RK-1. Supernatantul trebuie utilizat pentru analiză.

RK-1, PP-K2, BRS și reactivul de oprire neutilizat după deschiderea flacoanelor pot fi păstrate în flacoane închise la o temperatură de (2-8) °C în timpul termenului de expirare a trusei.

Restul de K + AT și K - după deschiderea flaconului poate fi păstrat în sticle închise la o temperatură de (2-8) ° C în perioada de expirare a trusei.

6.5 Prepararea soluției de K + AG

Atenţie! Soluția K + AG trebuie preparată cu 15 minute înainte de începerea analizei!

Pentru a restabili K + AG liofilizat, înainte de a deschide flaconul, atingeți ușor pentru a scutura particulele care aderă de pereții flaconului sau ai dopului. Deschideți flaconul și puneți dopul cu susul în jos pe o suprafață uscată. Adăugați 0,8 ml de apă distilată în flacon. Închideți flaconul cu un dop, țineți timp de 10 minute la o temperatură de (18-25) ° C și înclinați ușor și rotiți flaconul, amestecați conținutul acestuia până se dizolvă complet, evitând formarea spumei.

K + AG reconstituit poate fi păstrat într-un flacon închis la o temperatură de (2-8) ° C timp de o lună, la o temperatură de minus 20 ° C - timp de șase luni. Este permisă o singură îngheț-dezgheț al K + AG restaurat.

6.6 Prepararea soluției de Kg-2 în diluție de lucru

Luați volumul indicat în tabelul A.1 din flaconul cu Kg-2 și transferați-l în flaconul cu PP-K2. Amestecați bine conținutul flaconului, evitând formarea spumei.

Dacă se utilizează una sau mai multe benzi, luați cantitatea necesară de PP-K2 într-un flacon curat, adăugați Kg-2 în conformitate cu Tabelul A.1 și amestecați soluția fără spuma.

Atenţie! Soluția Kg-2 în diluție de lucru se prepară imediat înainte de utilizare! Soluția Kg-2 în diluție de lucru poate fi păstrată timp de 15 minute la o temperatură de (18-25) °C. Folosiți doar o nouă tavă de reactivi și vârfuri noi!

Restul de Kg-2 poate fi păstrat într-un flacon închis la o temperatură de (2-8) °C în timpul termenului de expirare a trusei.

6.7 Prepararea soluției substratului de lucru

Sticla cu cromogen TMB trebuie încălzită înainte de utilizare la o temperatură de (37±1)° C până la dizolvarea completă a cristalelor.

Se ia volumul indicat în tabelul A.1 din flaconul cu cromogen TMB și se transferă în flaconul cu BRS. Amestecați bine conținutul flaconului, evitând formarea spumei.

Dacă se utilizează una sau mai multe benzi, luați cantitatea necesară de BRS într-un flacon curat, adăugați cromogenul TMB în conformitate cu Tabelul A.1 și amestecați soluția fără spumare.

Atenţie! Soluția de lucru a substratului se prepară imediat înainte de utilizare într-un loc ferit de lumină! Soluția poate fi păstrată timp de 20 de minute la o temperatură de (18-25) ° C, ferită de lumină.

Soluția trebuie protejată de lumină și contactul cu metale sau ionii metalici. Soluția de substrat trebuie să fie incoloră înainte de utilizare. Vasele care vor intra în contact cu soluția de substrat în timpul reacției trebuie spălate fără utilizarea detergenților sintetici. Folosiți doar o nouă tavă de reactivi și vârfuri noi!

Restul cromogenului TMB poate fi păstrat într-un flacon închis la o temperatură de (2-8) °C în timpul termenului de expirare a trusei.

7 Cerințe de spălare a farfurii

În toate etapele de spălare, este necesar să se controleze umplerea tuturor puțurilor și îndepărtarea completă (aspirația) a lichidului din acestea;

Este necesar la fiecare spălare să se umple toate godeurile cu o soluție până la refuz (0,30-0,35 ml per godeu), fără revărsare și revărsare de lichid din puțurile învecinate;

Păstrați godeurile umplute cu soluția de spălare a plăcilor timp de 30 s;

La fiecare aspirație, îndepărtați cu grijă lichidul rămas din godeuri lovind cadrul cu benzile în poziție inversată pe hârtia de filtru pliată de mai multe ori, așezată pe o foaie de polietilenă;

Spălarea slabă a plăcii duce la rezultate incorecte.

8 Efectuarea analizei

8.1 În oricare două godeuri ale tabletei se adaugă 0,07 ml(70 µl) K + AT, în celelalte două fântâni - de 0,07 ml(70 µl) K + AG, în alte trei găuri - de 0,07 ml(70 µl) LA - .

Atenţie! La instalarea ELISA pe o bandă, este permisă utilizarea a două godeuri pentru K - - un godeu, pentru K + AT - un godeu, pentru K + AG - un godeu.

În godeurile rămase ale tabletei se adaugă 0,07 ml(70 µl) din probele studiate de ser uman (plasmă).

Atenţie! Fiecare probă trebuie luată cu un vârf de unică folosință!

8.2 În toate godeurile tabletei peste probele de control și probele de testare de ser de sânge (plasmă) pe loc contribuie prin 0,05 ml(50 µl) RK-1. Se amestecă conținutul godeurilor atingând ușor marginile plăcii.

8.3 (37 ± 1) ° Din cadrul 60 min.

Atenţie! Pentru (1-2) minute înainte de sfârșitul incubării, se prepară o soluție de Kr-2 în diluție de lucru (secțiunea 6.6).

8.4 Îndepărtați conținutul godeurilor cu mașina de spălat, apoi spălați godeurile plăcii cu soluția de spălare a plăcii (pasul 6.2) de șapte ori.

8.5 Adăugați în toate godeurile plăcii 0,15 ml(150 ul) soluție Kg-2în creșterea de lucru (clauza 6.6).

8.6 Sigilați placa cu o folie sau acoperiți cu un capac și incubați într-un termostat la o temperatură (37 ± 1) ° Din cadrul 10 minute.

8.7 Îndepărtați conținutul godeurilor plăcii cu o șaibă, apoi spălați godeurile plăcilor cu soluția pentru spălarea plăcii (secțiunea 6.2) de șapte ori.

8.8 Introduceți în toate godeurile tabletei 0,15 ml(150 µl) soluție de lucru a substratului(clauza 6.7).

Când se prepară o soluție de lucru a substratului (clauza 6.7) f lacon cu cromogen TMB trebuie încălzit înainte de utilizare timp de (3-5) minute la o temperatură de (37± 1) ° C până când cristalele sunt complet dizolvate.

8.9 Sigilați placa cu o folie sau acoperiți cu un capac și incubați într-un termostat la o temperatură (37 ± 1) ° CU într-un loc întunecat pentru 15 minute.

Atenţie! La sfârșitul incubației, în godeurile cu probe de ser care conțin anticorpi împotriva antigenului HIV-1 și/sau HIV-2 și/sau HIV-1 p24, culoarea soluției se va schimba de la incolor la albastru de intensitate diferită în funcție de concentrație. de anticorpi și/sau antigen în proba de ser de testat.

8.10 Opriți reacția peroxidazei prin adăugarea în toate godeurile 0,05 ml(50 µl) opriți reactivul.

Atenţie! Godeurile cu probe de ser care conțin anticorpi anti-HIV-1 și/sau HIV-2 și/sau antigenul HIV-1 p24 vor schimba culoarea soluției de la albastru la galben de intensitate diferită.

8.11 Nu mai târziu de (1-2) minute după oprirea reacției, determinați OD în godeuri în modul cu o singură undă la o lungime de undă 450 nm.

9 Prelucrarea rezultatelor analizei

9.2 Rezultatele sunt luate în considerare numai dacă:

Valoarea OPsr K - nu depășește 0,2 OE;

Fiecare valoare individuală a OP K - nu ar trebui să se abate de la OP-urile K - mai mult de 30%. Dacă una dintre cele trei valori ale OP K - depășește această limită, ar trebui exclusă din calculul OP K - . Dacă două dintre cele trei valori ODK sunt în afara acestei limite, testul trebuie repetat pe un nou set de reactivi;

Valoarea OPsr K + AT mai mare de 1,0 OE;

Valoarea OPsr K + AG este mai mare de 1,0 OE.

9.3 Dacă sunt îndeplinite condițiile de mai sus, se calculează valoarea critică (OPcrit.), OE, conform formulei (1):

OPcrit. = OPsr K - + 0,14 (1).

10 Caracteristici analitice și diagnostice

Sensibilitate trusa de reactivi ELISA-HIV 1.2 AGAT pentru detectarea antigenului HIV-1 p24 -

Specificitate trusa de reactivi ELISA-HIV 1.2 AGAT– 100% Standard AT(-)HIV. Panou standard de seruri care nu conțin anticorpi împotriva virusului imunodeficienței umane de primul și al doilea tip (HIV-1,2) și antigenul HIV-1 (p24). CJSC MBS.

11 Formular de eliberare a trusei

11.1 Setul este disponibil în cinci configurații:

1 set 1P - analiza manuala. Kitul este conceput pentru 12 curse ELISA pe o placă pliabilă: 1 tiraj - 1 bandă (8 găuri). În total - 96 determinări, inclusiv probe de control;

2 set 2M - analiza manuala. Kitul este conceput pentru 2 curse ELISA pe plăci monolitice: 1 run - 1 placă. Total - 192 determinări, inclusiv probe de control;

3 set 2P- analiza manuala. Setul este conceput pentru a ține 24 de producții ELISA pentru 2 pliabil x tablete: 1 set - 1 bandă (8 găuri). Total - 192 de definiții, inclusiv probele de control;

4 set A2M - analiză pe un analizor automat. Kitul este conceput pentru 2 teste ELISA pe plăci monolitice: 1 run - 1 placă. Total - 192 determinări, inclusiv probe de control;

5 set A2P - analiză pe un analizor automat. Kitul este conceput pentru 24 de rulări ELISA pe 2 plăci pliabile: 1 rulare - 1 bandă (8 găuri). Un total de 192 de determinări, inclusiv probe de control.

12 Condiții de depozitare și utilizare a trusei

12.1 Setul trebuie depozitat într-o cameră curată, ferită de umiditate și lumină, la o temperatură de (2-8) °C pe toată durata de valabilitate. Nu înghețați componentele kit-ului.

12.2 Pentru a obține rezultate fiabile, este necesară respectarea strictă a instrucțiunilor de utilizare a trusei.

12.3 Data de expirare a trusei 12 luni.

anexa a

Tabelul A.1 - Consumul de reactivi din trusa ELISA

reactiv, ml

Număr benzi folosite, buc.

Prepararea soluției pentru spălarea plăcii

FSB-T×25

distilat apă

Prepararea soluției Kg-2 în diluție de lucru

RR-K2

Pregătirea soluției de lucru a substratului

Cromogen TMB

Bibliografie

	Reglementări sanitare	Ordinul Ministerului Sănătății al Republicii Belarus din 16 decembrie 1998 nr. 351 Cu privire la revizuirea reglementărilor departamentale care reglementează problemele legate de problema HIV/SIDA
	Ordinul Ministerului Sănătății al Republicii Belarus din 25 noiembrie 2002 nr. 165 Despre efectuarea dezinfectării și sterilizării de către instituțiile sanitare
	Decretul Ministerului Sănătății al Republicii Belarus din 28 aprilie 2010 nr. 47 Cu privire la aprobarea Instrucțiunii privind procedura de efectuare a examinărilor medicale obligatorii ale angajaților și invalidarea anumitor rezoluții ale Ministerului Sănătății al Republicii Belarus

Pentru a efectua o evaluare cuprinzătoare a stării corpului, se utilizează o metodă de diagnostic ELISA. Testul de sânge ELISA este conceput pentru a diagnostica imunodeficiențe infecțioase, hematologice, primare și secundare.

Ce este analiza ELISA

Mulți pacienți sunt interesați de metoda ELISA: ce este, pentru ce este studiul. Imunotestul enzimatic a fost folosit relativ recent. Inițial, a fost folosit pentru a studia structurile antigenice și a fost efectuat numai în scopuri științifice. Apoi, oamenii de știință au ajuns la concluzia că, cu ajutorul enzimelor, este posibil să se identifice anticorpi specifici care apar ca răspuns la o boală în curs de desfășurare.

Inițial, această tehnică a fost folosită doar de instituțiile medicale cu profil îngust, în principal la stațiile de transfuzie de sânge. De o importanță deosebită este metoda ELISA pentru depistarea infecției cu HIV.

Astăzi, această metodă are un domeniu larg de aplicare. Laboratoarele moderne îl folosesc pentru a diagnostica:

• tumori;
• tulburări hormonale;
• infecții;
• procese infecțioase cronice sau transferate anterior;
• helminti.

Dacă în organism are loc un proces infecțios, atunci acest tip de diagnostic este considerat cel mai optim pentru determinarea tipului de boală.

Esența metodei și tipurile sale

Metoda ELISA - ce este, care este esența acestui tip de cercetare? Aceasta și multe alte întrebări sunt de interes pentru pacienți. Baza acestei metode de diagnostic este legarea celulelor imune ale organismului de antigenele agenților infecțioși. Complexul rezultat este determinat folosind o enzimă specială.

Pentru a înțelege principiul metodei ELISA, trebuie să știți cum decurge reacția antigen-anticorp. Un antigen este o moleculă de proteină străină organismului care intră odată cu infecția. Particulele de sânge străin care nu se potrivesc în grup sunt, de asemenea, considerate antigene. În organism, ele provoacă un răspuns imunitar menit să protejeze împotriva substanțelor străine. Prin urmare, corpul uman produce anticorpi - imunoglobuline care se pot atașa de antigene, formând un complex imunitar. Astfel de compuși sunt mult mai ușor de recunoscut și distruși de către celulele imune.

Reacția pentru prezența unor astfel de complexe imune se efectuează în laborator, folosind compuși gata preparati pentru a determina dacă există altele similare în sânge.

Esența metodei ELISA este destul de simplă, totuși, datorită faptului că se efectuează un test de sânge pentru a detecta multe infecții și boli, există mai multe dintre soiurile sale. Fiecare diferă în schema de conduită și domeniul de aplicare. Poate fi ELISA directă sau indirectă. Metoda directă implică utilizarea anticorpilor imobilizați care reacționează cu antigenele. Principalul avantaj al acestei metode este că toate procesele pot fi automatizate, ceea ce înseamnă că diagnosticarea durează puțin timp.

Metoda indirectă implică utilizarea anticorpilor secundari. Iar pe faza solidă, antigenul este imobilizat. Analiza vă permite să determinați anticorpi la diferiți antigeni. Acest lucru ajută la obținerea unui rezultat mai precis, dar metoda este complexă.

Beneficiile studiului

Metoda ELISA are multe avantaje față de alte metode de diagnostic. Cele principale includ:

• sensibilitate crescută;
• stabilitate în timpul depozitării ingredientelor;
• viteza de diagnosticare;
• se poate folosi o cantitate mică de material de testat;
• este posibilă automatizarea tuturor proceselor;
• infecția poate fi detectată într-un stadiu incipient.

Această metodă de diagnosticare este universală, prin urmare este potrivită pentru examinarea în masă. Cu ajutorul analizei, este posibil să urmăriți dinamica cursului procesului infecțios.

Indicații pentru analiză și prelevare de probe de material

Efectuarea unui studiu folosind metoda ELISA poate fi prescrisă dacă sunt suspectate o varietate de boli:

Sângele venos este examinat pentru prezența anticorpilor. Înainte de analiză, elementele care pot complica studiul sunt izolate de aceasta. Alte fluide biologice pot fi, de asemenea, prelevate.

Pentru a obține cele mai precise informații, prelevarea de sânge se efectuează pe stomacul gol. Dacă procedura a fost prescrisă pentru a determina o infecție latentă, atunci cu câteva săptămâni înainte de analiză, ar trebui să încetați să luați medicamente antibacteriene și antivirale. În funcție de echipamentul laboratorului de unde a fost prelevat materialul, rezultatul poate fi obținut în decurs de o zi. În cazuri de urgență, acest timp este redus la câteva ore.

Analiza pentru sifilis

Utilizarea metodei ELISA ajută la determinarea prezenței multor infecții în organism, în special sifilisul. Pentru studiu, sângele este luat dintr-o venă pe stomacul gol. Apoi se efectuează un studiu care ajută la determinarea nu numai a prezenței bolii în organism, ci și a momentului exact al debutului acesteia, deoarece în cursul bolii unii anticorpi sunt înlocuiți cu alții într-o ordine strict definită.

În faza acută, indicând o evoluție prelungită a bolii, sau în timpul unei exacerbări a unei infecții cronice, în sânge vor fi detectate imunoglobuline de tip M. Prezența imunoglobulinelor de tip A indică faptul că infecția trăiește în organism mai mult de 4 săptămâni. Imunoglobulinele din grupa G indică înălțimea bolii sau a terapiei anterioare.

În funcție de gradul de culoare al godeurilor, se evaluează intensitatea cursului procesului infecțios, deoarece saturația sa depinde de numărul de complexe imune formate.

Testul HIV

Metoda ELISA este, de asemenea, utilizată pentru a analiza pentru că, în acest caz, are anumite caracteristici care sunt asociate cu evoluția și progresia bolii. Această metodă de cercetare este considerată cea mai acceptabilă pentru determinare, cu toate acestea, trebuie efectuată nu mai devreme de o lună după expunerea la factorii de risc. Acest lucru se datorează prezenței unei perioade de incubație care durează de la 45 de zile la 6 luni. De aceea analiza trebuie repetată după șase luni.

• ascariaza;
• giardioza;
• toxoplasmoza etc.

În ciuda tuturor avantajelor, există și dezavantaje ale metodei ELISA. Principalul dezavantaj este că atunci când efectuează un studiu, medicul trebuie să aibă în prealabil o presupunere despre boală.

Când nu există nicio modalitate de a găsi accidental agentul patogen și de a determina proprietățile sale imunologice enzimatice. Testul indică doar prezența anticorpilor în sângele pacientului. În plus, aceasta este o analiză destul de costisitoare.

Descifrarea analizei

Rezultatul unui ELISA calitativ va fi fie prezența anticorpilor, fie absența acestora în sânge. Dacă se efectuează o analiză cantitativă, atunci concentrația de anticorpi poate fi exprimată fie într-o valoare numerică, fie într-un anumit număr de semne +.

În plus, indicatori precum:

Indicatorul IgM indică cursul unui proces infecțios acut în organism. Absența sa completă poate indica absența agentului cauzal al bolii sau trecerea acestuia la stadiul cronic.

O citire IgA cu un test IgM negativ indică o infecție cronică sau latentă. Prezența simultană a IgM și IgA indică faptul că boala se află într-un stadiu acut. Prezența IgG indică trecerea bolii la stadiul cronic sau recuperarea completă și dezvoltarea imunității.

Acum există teste speciale ELISA pe care le puteți face singur.

S.N. IGOLKINA, V.F. PUZYREV, L.G. ZININA, N.M. DENISOVA, A.N. BURKOV,

A.P. OBRYADINA, T.I. ULANOVA
SRL „Asociația științifică și de producție „Sisteme de diagnosticare”,

Nijni Novgorod
SISTEME DE TESTARE IMUNĂ ENZIMĂ „DS-ELISA-HBeAg” și „DS-ELISA-anti-HBe” PENTRU DIAGNOSTICUL SPECIFICE ȘI PREDICȚIA REZULTATELOR HEPATITEI B ACUTE ȘI CRONICE
Hepatita B este o boală infecțioasă virală caracterizată de severă

boala inflamatorie a ficatului. Aproximativ 1% dintre decese au loc în

perioada acută a bolii, în 4-10% din cazuri are loc o transformare în cronică

proces cu posibila formare de ciroză hepatică ulterioară și primară

hepatocarcinoame.

În ciuda tendinței de scădere a incidenței hepatitei acute B, continuă să se formeze un grup periculos din punct de vedere epidemiologic de pacienți care sunt diagnosticați pentru prima dată cu hepatită virală cronică, precum și un grup de purtători ai agentului cauzal al bolii. Un prognostic nefavorabil rămâne asociat cu o incidență ridicată a hepatitei B în rândul populației de vârstă reproductivă, precum și în rândul adolescenților.

Prin urmare, problemele de tratament, prevenire și diagnosticare a hepatitei B sunt acum deosebit de relevante. În prezent, metodele imunoenzimatice sunt utilizate pe scară largă pentru a detecta markerii acestei infecții. Cei mai importanți markeri serologici ai HBV includ e-antigenul (HBeAg) și anticorpii la e-antigenul (anti-HBe). HBeAg este asociat cu infecția sângelui crescută, indicând replicarea activă a virusului hepatitei B (HBV). S-a stabilit că titrurile mari de HBeAg corespund unei activități ridicate a ADN-polimerazei și sunt întotdeauna combinate cu detectarea particulelor Dane complete. Când serul care conține HBeAg intră în sângele unei persoane sănătoase, riscul de infecție este cu multe ordine de mărime mai mare decât după seroconversie.

În hepatita acută B, AgHBe este detectat în sânge în stadiile incipiente ale procesului infecțios deja la primele manifestări clinice ale bolii, cu o săptămână în urma apariției AgHBs. Hepatita acută B (AHB) cu evoluție ciclică se caracterizează prin circulația pe termen scurt a HBeAg. Curând, la 2-3 săptămâni ale perioadei icterice, apare anti-HBe, ceea ce face posibilă prezicerea unui rezultat favorabil al bolii.

Anti-HBe circulă în sânge timp de 2-5 ani, mai rar timp de câteva luni.

Debutul seroconversiei AgHBe-antiHBe marchează o scădere bruscă a activității

proces infecțios. Detectarea HBeAg în sângele pacienților după 2 luni de boală indică cronicitatea procesului patologic. În acest caz, anti-HBe se poate forma la mulți ani după apariția anticorpilor la HBcAg sau să nu fie detectat deloc.

Apariția anti-HBe poate avea o valoare prognostică adversă în

perioadă acută a VHB în formele severe, care corespunde unei mutații în zona pre-core cu

formarea tulpinii "e-" a VHB.

scop această lucrare a fost dezvoltarea de foarte sensibile și specifice

Sisteme de testare ELISA pentru detectarea HBeAg și anti-HBe și evaluarea principalelor caracteristici ale acestora.

Materiale și metode.

1. Sistem de testare imunoenzimatică „DS-ELISA-HBeAg”. Început valid de testare

sunt anticorpi policlonali de capră la HBeAg recombinant, produși de NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod, adsorbiți pe fază solidă, și un conjugat, care sunt anticorpi policlonali de capră la HBeAg recombinant, marcați cu peroxidază de hrean, produs de NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod. Schema de analiză este un „sandwich” într-o etapă.Timpul total de reacție este de 1,5 ore. Proba de ser este analizată nediluată.

2. Sistem de testare ELISA „DS-ELISA-anti-HBe”. Baza testului este

Ag HBe recombinant (AHBV 102), produs de NPO Diagnostic Systems,

Nijni Novgorod, adsorbit pe fază solidă și conjugat anti-IgG cu peroxidază de hrean, produs de Sorbent Service, Moscova. Reacția are loc în două etape. Serul de testat este adăugat la antigenul imobilizat la o diluție de 1/10 și, după incubarea și îndepărtarea componentelor nelegate, imunocomplexele specifice sunt detectate utilizând anticorpi monoclonali de șoarece împotriva IgG umane marcate cu peroxidază de hrean.

3. Pentru evaluarea sistemelor de testare dezvoltate au fost utilizate 2178 de probe de ser

sânge. Dintre acestea, 480 de probe au fost de la donatori sănătoși. 1680 de mostre reprezintă

sunt probe de ser de sânge care conțin diverși markeri ai virusului hepatitei B.

Optsprezece probe au fost obținute de-a lungul timpului de la pacienți cu un diagnostic clinic de hepatită virală acută B. Anterior, toate probele au fost testate pentru prezența HBsAg, HBeAg, anti-HBe, anti-HBc folosind sisteme de testare fabricate de NPO Diagnostic Systems, Nizhny Novgorod: „ELISA-HBsAg / m”, „DS-ELISA-HBeAg”, „ DS-ELISA-anti-HBe", "ELISA-anti-HBc".

4. Evaluarea comparativă a sistemelor de testare dezvoltate a fost efectuată folosind

medicament comercial „Monolisa HBe”, fabricat de BIO-RAD, Franța;

Rezultate și discuții. NPO „Diagnostic Systems” a dezvoltat 2 noi truse de diagnostic: „DS-ELISA-HBeAg” și „DS-ELISA-anti-HBe”. Sistemul de testare „DS-ELISA-HBeAg” este conceput pentru a detecta e-antigenul virusului hepatitei B în serul (plasma) sângelui uman prin imunotest enzimatic și poate fi utilizat pentru diagnosticare specifică, determinând activitatea procesului infecțios , prezicând severitatea și rezultatul hepatitei B.

Sistemul de testare „DS-ELISA-anti-HBe” este conceput pentru a detecta anticorpi IgG la antigenul e al virusului hepatitei B în ser uman (plasmă) și poate fi

utilizat pentru prezicerea cursului procesului infecțios și monitorizarea terapiei în curs pentru hepatita B.

Pentru a studia specificitatea noilor teste, a fost estimată distribuția

densitatea optică (OD) a probelor de ser de sânge care conțin și nu conțin

HBeAg sau anti-HBe. Au fost utilizate probe de ser de sânge de la donatori sănătoși și probe de ser de sânge selectate pentru diverși markeri ai virusului hepatitei B.

statii de transfuzie de sange. Rezultatele studiului au arătat o separare semnificativă a celor două populații. Valorile OD ale probelor de ser care nu conțin HBeAg au variat între 0,011 și 0,111, iar vârful principal al probelor de ser care conțin HBeAg a variat între 2,186 și 3,186 (Figura 1a).

Fig.1a. Distribuția OD a probelor de ser care conțin și nu conținHBeAgîn sistemul de testare „DS-ELISA-HBeAg»
Vârful corespunzător grupului de seruri cu DO scăzută (0,3-0,6) este probabil să fie probe de ser prelevate în stadiile incipiente ale procesului infecțios.

Deja în perioada de incubație, HBsAg și HBeAg sunt înregistrate în mod regulat în sângele pacienților, ceea ce confirmă potențialul lor pericol epidemiologic.

Gama de densitate optică a probelor de ser care nu conțin anti-HBe

a fost în intervalul de la 0,002 la 0,122, iar OD de vârf principal al probelor de ser care conțin anti-HBe a fost în intervalul de la 2,431 la 3,231 (Figura 1b).

Orez. 1b. Distribuția OD a probelor de ser care conțin și nu conțin anti-HFi, în sistemul de testare „DS-ELISA-anti-HBeAg»
Au fost studiate caracteristicile distribuției OD a probelor pozitive anti-HBe.

ser care contine ( n=78) și care nu conține HBsAg ( n=56).


Orez. 2a. HBe-probe de ser pozitive care conținHBsAgîn sistemul de testare „DS-ELISA-anti-HBe».

Fig.2b. Caracteristicile distribuției OP anti-HBe-probe de ser pozitive care nu contin HBsAgîn sistemul de testare „DS-ELISA-anti-HBe».
Densitățile optice a 87% din probele de ser anti-HBe pozitive care nu au conținut HBsAg au variat între 0,41 și 0,81 (Figura 2b). În același timp, doar 14% dintre probele de ser anti-HBe pozitive care conțin HBsAg au avut OD în acest interval (Figura 2a). Se știe că în faza de convalescență târzie cu reactivitate negativă la HBsAg, există o scădere treptată a titrurilor de anticorpi la HBeAg (Figura 2b). Prin urmare, este posibil ca concentrația predominantă a probelor anti-HBe pozitive să corespundă cu o DO mai mică de 0,8.

Datele obținute indică fiabilitatea separării pozitive și

probe negative de ser sanguin indiferent de stadiul bolii. Studiul sensibilității și specificității sistemelor de testare „DS-ELISA-HBeAg” și „DS-ELISA-antiHBe” a fost efectuat în comparație cu testul „Monolisa HBe” („BIORAD”, Franța) (tabelul 1).

tabelul 1
Caracteristici comparative ale sensibilității și specificității

sisteme de testare DS-ELISA-HBeAg și DS-ELISA-antiHB

Index	Definiţia HBeAg		Definiţia anti-HBe
	NPO "DS", DS-ELISA-HBeAg	BIO-RAD, „Monolisa HBe”	NPO „DS”, DS-ELISA-antiHBe	BIO-RAD,
Cantitate cercetat mostre	67	67	32	32
Dezvăluit pozitiv mostre	47	47	16	16
Dezvăluit negativ mostre	20	20	16	16

Datele prezentate în Tabelul 1 arată acord 100% între rezultate.

Se știe că indicația combinată de AgHBe și anti-HBe, în special evaluarea lor cantitativă, are valoare prognostică suplimentară. O creștere rapidă a titrului anti-HBe caracterizează un răspuns imun umoral activ și practic elimină amenințarea cronicității. Am analizat modificarea conținutului de HBeAg/anti-HBe în probele de ser de sânge ale pacienților cu diagnostic clinic de hepatită virală acută B (tabelul 2).

masa 2
Dinamica seroconversiei AgHBe/anti-HBe la pacienții cu hepatită acută B

Examinat bolnav	Ziua prelevării de sânge*	HBeAg	anti-HWe Ref./Opt.		Anti-HBc	anti- IgM HBc
	1	1,4+	2,1+	+	+	+
	12	0,5-	1,0+	+	+	+
	21	0,3-	1,3+	+	+	+
	1	1,2+	1,2+	+	+	+
	5	0,4-	1,0+	+	+	+
	13	0,2-	2,5+	+	+	+
	1	1,2+	0,6-	+	+	+
	21	0,2-	4,6+	+	+	+
	30	0,2-	9,7+	+	+	+
	1	2,1+	0,5-	+	+	+
	8	0,6-	1,1+	+	+	+
	28	0,3-	2,8+	+	+	+
	1	0,7-	2,2+	+	+	+
	8	0,3-	2,2+	+	+	+
	15	0,3-	2,8+	+	+	+
	38	0,2-	3,0+	+	+	+
6	1	1,1+	4,4+	+	+	+
	14	0,5-	3,8+	+	+	+

* de la internare la spital
Toate probele de ser au fost testate pentru prezența markerilor serologici.

OGV: HBsAg, anti-HBc, anti-HBc IgM. Perioada de observare a variat de la 13 la 38 de zile. La pacienții nr. 1, nr. 2 și nr. 6, anti-HBe a fost detectat deja pe fondul unei scăderi a titrului HBeAg. La pacienții nr. 3 și nr. 4, anti-HBe a apărut după dispariția AgHBe din serul sanguin în zilele 21 și respectiv 8. Analiza detectării HBeAg în serul sanguin al pacientului nr. 5 la internarea în spital a arătat un rezultat negativ. În același timp, conversia la anti-HBe a fost înregistrată deja în prima zi a examinării.

Toți subiecții au prezentat o tendință de creștere a titrului de anticorpi la HBeAg în

ser de sânge, ceea ce face posibilă prezicerea dinamicii favorabile a clinicii

manifestări ale OGV și o recuperare rapidă.

Studiul noilor sisteme de testare a arătat fiabilitatea lor ridicată de diagnosticare. Rezultatele comparării DS-ELISA-HBeAg" și "DS-ELISA-antiHBe" au arătat acord 100% cu testul "Monolisa HBe".

În studiul probelor de ser ale pacienților cu hepatită B în dinamică, teste

a confirmat sensibilitate și specificitate ridicate.

Timpul scurt de incubare a probelor de testat și a conjugatului (1 h) face posibilă determinarea tacticii corecte pentru efectuarea măsurilor terapeutice în cel mai scurt timp posibil. Sistemele de testare create sunt ușor de configurat, economice (pentru determinarea HBeAg sunt necesari 50 µl de ser și 10 µl de ser pentru determinarea anti-HBe). Caracteristicile de înaltă calitate ale testelor fac posibilă utilizarea cu succes a acestora în prezicerea cursului procesului infecțios și monitorizarea terapiei în curs pentru hepatita B.
LITERATURĂ

1.Mayer K.P. Hepatita și consecințele hepatitei / K.P. Mayer.– M., GEOTAR, Medicină, 1999.- C.720

2.Onishcenko G.G. Răspândirea hepatitei virale ca amenințare la adresa securității naționale / G.G. Onishchenko, L.A. Dementieva // Jurnal de microbiologie. –2003.-Nr 4.- P.93-99.

3.Sorinson S.N. Hepatită virală / S.N.Sorinson. - Sankt Petersburg, Teza, 1997.- 306 p.

4. Baumeister M. Hepatitis B Virus e Antigen Specific Epitopes and Limitations of Commercial Anti-HBe Immunoassays / M. Baumeister // Journal of Medical Virology.- 2000.-N 60.- P.256-263.

5.Kane M. Program global de control al infecției cu hepatita B / M. Kane// Vaccin. - 1995.-N131(Supl. 1).- R.47-6. Shunichi SatO. Tulpini de virus al hepatitei B cu mutații în promotorul de bază la pacienții cu hepatită fulminantă / Shunichi Sato, Kazuyuki Suzuki // Annals of Internal Medicine. - 1995.- N122.- R.241-248.

7. Ou J.-H. Biologia moleculară a virusului hepatitei B și antigen./ J.-H.Ou // Journal of Gastroenterology and Hepatology. - 1997.- Nr. 12 (Suppl.1) - R. 178-187.

8.Tiollais P. Virusul hepatitei B. / P.Tiollais, C.Pourcel, A.Dejean // Natura. - 1985. - P.317, 489-495
Publicat: Zh. „Diagnosticare clinică de laborator” - 2005.-№6-S.-34-37

HIV este flagelul generației noastre. Ce metode există pentru diagnosticarea HIV, informații aprofundate despre testul ELISA pentru HIV. Cum să luați, cum să interpretați rezultatele analizei.

Virusul imunodeficienței umane este una dintre cele mai de temut infecții ale generației noastre.

HIV are un efect distructiv asupra sistemului nostru imunitar, iar dacă progresul bolii nu este oprit la timp, acesta se poate transforma în sindrom de imunodeficiență dobândită. HIV se transmite prin contactul direct între parteneri în timpul actului sexual prin organele genitale masculine și feminine. O altă cauză a infecției poate fi intrarea virusului prin sânge. Acest lucru se întâmplă din cauza folosirii instrumentelor nesterile, a transfuziei de sânge infectat și chiar de-a lungul generațiilor: unui copil de la o mamă infectată în timpul alăptării.

Până acum, oamenii de știință din întreaga lume sunt nedumeriți cu privire la crearea unei noi generații de medicamente care pot vindeca SIDA, cu toate acestea, în ciuda ritmului mare de progres științific, virusul imunodeficienței umane continuă să se răspândească pe întreaga planetă.

ELISA - o metodă de diagnosticare a HIV

Oamenii de știință din generația secolului al XX-lea au dezvoltat mai multe metode de diagnosticare a HIV, dintre care cea mai importantă este considerată test imunosorbent legat. ELISA pentru HIV a început să fie efectuat relativ recent - la începutul anilor nouăzeci. De-a lungul timpului, metoda a fost perfecționată, a dobândit noi detalii. Acum fiabilitatea metodei ELISA este una dintre cele mai ridicate - aproximativ 98%. Prin urmare, această metodă este folosită din ce în ce mai des.

ELISA este primul test pe care îl întâlnește un pacient când testează HIV. Metoda ELISA determină prezența anticorpilor în sânge. Dacă testul constată prezența anticorpilor în sânge, atunci virusul este prezent. Cu toate acestea, informațiile despre acest test trebuie să fie susținute de alte teste, cum ar fi blotting imun (IB) și metoda de ultimă generație, reacția în lanț a polimerazei (PCR).

Anticorpii sunt compuși proteici speciali care sunt produși de celulele plasmatice după o reacție la o infecție care intră în organism (anticorpii încep să se formeze la 1-2 luni după infecție).

Cauzele HIV

Medicul vă va scrie o trimitere pentru analiză dacă ați fost în contact cu o persoană infectată cu HIV sau există riscul de infectare. Generațiile de oameni cu risc de infecție cu HIV includ:

• urmează un curs de tratament injectabil în decurs de o lună;
• întreține relații sexuale fără mijloace speciale de protecție;
• purtători de infecții transmise în timpul contactului sexual;
• pacienții după ce au suferit o transfuzie de sânge sau o injecție pentru a descoperi cauza coagulării sângelui în anii optzeci.

Dacă aveți îndoieli cu privire la statutul dumneavoastră HIV și temeri legate de posibilitatea de infectare, este recomandat să solicitați imediat ajutor de la orice instituție medicală din țara noastră pentru un test HIV complet. Rezultatele testelor sunt primite în termen de o lună. Persoanele cu risc de HIV li se recomandă să fie testate la fiecare 4 luni.

Cum se face o analiză

Nu există nicio pregătire specială pentru efectuarea unui test de sânge pentru HIV, dar este mai bine urmați regulile simple:

• este mai bine să nu mâncați seara, ci să faceți o analiză pe stomacul gol dimineața;
• nu se recomandă încărcarea corpului cu muncă fizică;
• mâncați alimente sănătoase, abțineți-vă de la țigări și alcool pentru un timp;
• pentru a exclude indicatorii falși de testare, nu trebuie să faceți o analiză după tratamentul bolilor grave.

Infecția cu virusul imunodeficienței umane este un diagnostic serios. Greșelile de diagnosticare pot duce la consecințe dezastruoase. Analiza ELISA pentru HIV este cea mai accesibilă metodă de cercetare, dar nu este informativă în toate cazurile.

ELISA - imunotest enzimatic. Sarcina metodei ELISA este de a detecta anticorpi împotriva virusului imunodeficienței în materialul biologic. Folosind metoda, este posibilă urmărirea prezenței în lichid nu a virușilor înșiși, ci doar a anticorpilor produși ca răspuns la prezența acestora. ELISA este utilizat pe scară largă în diagnosticul bolilor cu transmitere sexuală. Ajută la identificarea bolilor cu transmitere sexuală.

Există mai multe tipuri de ELISA: variantă directă, variantă indirectă, metoda sandwich. În orice caz, tehnica se bazează pe determinarea prezenței anticorpilor, care servesc ca un indicator al pătrunderii unui agent străin. Pentru a dezvălui aceste „semne”, componenta biologică este tratată cu enzime.

ELISA detectează anticorpii cu o precizie de 96 - 98%, eroarea este neglijabilă. Este de 2 - 4%.

ELISA - o metodă de diagnosticare a HIV

Analiza ELISA pentru HIV este prima etapă a diagnosticului. Antigenele virusului imunodeficienței sunt proteinele p24, p15, p17, p31 și glicoproteinele gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.

Pentru a detecta o proteină virală, o porțiune de sânge este prelevată dintr-o venă. O probă trimisă pentru testarea sângelui ELISA este tratată cu reactivi de imunotest enzimatic. Serul este izolat din sânge. Dacă în timpul studiului sunt găsite, atunci virusul este deja prezent în sânge.

Sângele se administrează strict pe stomacul gol. Cu 2 zile înainte de analiză, nu se recomandă consumul de alimente grase și consumul de alcool. Ar trebui să încetați să luați medicamente antivirale în decurs de 14 zile.

Avantajele metodei:

• cost relativ scăzut;
• stabilitate ridicată a reactivilor;
• sensibilitate crescută;
• timp scurt de livrare;
• influența minimă a factorului uman.

Sistemele moderne de testare pentru ELISA sunt produse conform standardelor mondiale. Acest lucru îmbunătățește acuratețea metodei.

ELISA nu dă întotdeauna rezultate fiabile. După ce virusul intră în sânge, începe stadiul latent (ascuns) de dezvoltare. Perioada până când virușii au început să se înmulțească și anticorpii nu s-au format încă se numește „timp fereastră seronegativă”. Este inutil să faci ELISA în această etapă. Dacă a apărut o infecție, rezultatul va fi . Cât de repede se detectează virusul depinde de câte celule periculoase au intrat în organism. Cu actul sexual neprotejat sau transfuzia de sânge infectat, această perioadă va fi minimă.

Pentru o fiabilitate ridicată a ELISA pentru HIV, studiul este efectuat de trei ori. Termenele limită pentru ELISA pentru virusul imunodeficienței umane:

• 6 săptămâni după contactul probabil,
• in 3 luni,
• șase luni mai târziu.

ELISA de a 4-a generație pentru HIV este metoda cea mai informativă în stadiile incipiente ale infecției. Poate fi efectuat încă de la 1 lună de la presupusa infecție. Testul este scump în comparație cu omologul din a 3-a generație. Prin urmare, în instituțiile medicale publice, este utilizat ca metodă suplimentară de diagnostic. Testul 3 se efectuează gratuit. Dacă este imposibil să se ofere un răspuns fără ambiguitate pe baza rezultatelor sale, pacientul este trimis pentru ELISA de a 4-a generație.

Important! Imediat după infecție, o persoană devine contagioasă. Este periculos pentru alții, chiar și atunci când nu știe încă despre diagnosticul său!

Dacă în timpul ELISA sunt detectați anticorpi la antigenele HIV, sunt necesare studii suplimentare. Aparține acestora. Fiabilitatea acestei metode este de 80%. Cu ajutorul PCR se examinează sângele, materialul seminal și secrețiile vaginale. Fluidul biologic este împărțit într-un reactor medical, apoi este supus unui tratament enzimatic. Ca rezultat, se obțin date privind concentrația celulelor HIV într-un mediu lichid. Datorită erorii mari (20%), cu un rezultat pozitiv, se efectuează suplimentar imun blotting.

Următorul pas de diagnostic este testul Combo (sau blotting imun). Acesta este un studiu extrem de sensibil (98% de încredere) și ar trebui făcut dacă rezultatele ELISA sunt neconcludente la 6 luni.

Interpretarea rezultatelor ELISA

Timpul de decriptare este de la 24 la 48 de ore. Dacă este necesară obținerea de informații urgent (este necesară o intervenție chirurgicală), decodarea se realizează în 2 ore. Posturile medicale provinciale nu au întotdeauna reactivii necesari. Proba se prelevează la locul de circulație, apoi este transferată în centrul regional. În astfel de circumstanțe, rezultatul poate fi aflat în 1-2 săptămâni.

Rezultatul unui imunotest enzimatic poate fi fie pozitiv, fie negativ; nu exista alte optiuni.

Chiar dacă rezultatul a fost pozitiv în timpul testului ELISA primar și repetat, pacientul nu poate fi recunoscut ca fiind infectat cu HIV. Posibilă eroare. Motive pentru un rezultat fals pozitiv:

• boli cronice;
• boli infecțioase prelungite;
• sarcina.

Prin urmare, rezultatul analizei ar trebui clarificat prin studii suplimentare.

Dacă în timpul imunoblotting pentru HIV (reactiv), o persoană este considerată infectată cu HIV, ceea ce înseamnă că este sănătoasă.

Celulele virusului se adaptează în cele din urmă la medicamentele prescrise. Pentru control, testul ELISA se repetă periodic.

Uneori, imunoblotting-ul arată un rezultat fals negativ. Virusul imunodeficienței extrem de rar 6 luni (sau mai mult). Acest lucru este posibil dacă o cantitate mică de celule virale a intrat în sânge. În 0,5% din numărul total de cazuri, infecția poate fi diagnosticată numai după un an. În 99,5%, în termen de șase luni de la infecție, un ELISA va da un rezultat fiabil.

Chiar și cu studii de înaltă precizie, există încă o marjă de eroare de 2%. Nu trebuie să uităm de factorul uman. Pentru a elimina posibilitatea de eroare, testul poate fi efectuat în 2 instituții diferite.